朝鲜淫羊藿多糖提取分离纯化及其肿瘤免疫活性研究

发布时间：2018-05-19 22:44

本文选题：朝鲜淫羊蕾 + 多糖　；参考：《南京中医药大学》2017年硕士论文

【摘要】：人参、茯苓等很多富含多糖的补益类中药在增强自身免疫方面得到广泛的开发利用,多糖也在辅助肿瘤治疗的研究中得到广泛的认可。淫羊藿作为中国传统补益类中药,也具有提高免疫抗肿瘤的功效,但有关其多糖类成分的文献报道较为单薄,为了更好的解析淫羊藿强身健体的补益功效,本文在实验室对朝鲜淫羊藿的研究基础上,从朝鲜淫羊蕾多糖出发,对其分离纯化和肿瘤免疫活性进行了系统地探索,对纯化得到的一个活性较好的淫羊蕾多糖进行理化性质、结构解析和肿瘤免疫机制的研究。主要内容包括以下几点:建立朝鲜淫羊藿粗多糖水提醇沉的最佳工艺。利用Box-Benhnken中心组合设计试验,响应面分析法对结果进行分析,确定的最佳提取方案为:在87℃条件下,16倍量的水,提取2次,每次4小时。由此工艺所得多糖得率的均值为1.023%,而根据回归方程,多糖得率理论预测值为1.045%,前后相对误差仅为2.15%,说明运用响应面法优化得到的模型可行,参数也较为合理。验证朝鲜淫羊藿粗多糖体内肿瘤免疫药效。建立C57BL6小鼠Lewis肺癌模型,淫羊蕾多糖给药14天。结果表明:一定剂量下的粗多糖能够有效地阻止肿瘤机体免疫器官的萎缩,可以不同程度地提高血液中免疫细胞因子IL-2、IFN-γ的水平,同时促进脾脏细胞增殖,逆转在肿瘤发展过程中,造成的CD4+T和CD8+T细胞二者的比例下降,抑制T细胞限速酶IDO在肿瘤组织的表达,改变血液中M1,M2型巨噬细胞的比例,破坏肿瘤生长微环境从而间接发挥抗肿瘤作用。以免疫活性为导向,耦合现代分离纯化技术对朝鲜淫羊藿粗多糖进行筛选。粗多糖首先进行透析(MW:3000)脱小分子物质,然后根据表面电荷的不同和分子大小的差异,分别用DEAE-52和Sephadex-100对其进行分离,利用lewis肿瘤细胞毒性实验、体外脾细胞增殖实验,腹腔巨噬细胞吞噬实验、细胞因子的分泌功能实验进行体外活性筛选,得到免疫活性较高的F3,命名为EPS。综合应用高效液相、核磁共振、红外、紫外等手段对所得的纯化多糖EPS进行结构解析。得出其单糖组成:岩藻糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖。摩尔比为1:1.28:10.97:0.43:7.41:2.77:10.34:11.33,高效凝胶渗透色谱显示EPS为单峰,说明其为均一物质,经GPC软件计算得其平均分子量(MV)为180×104Da,红外可以显示出多糖类物质的一般吸收特征峰,在波数为1017,840,618,537cm-1处有吸收,表明EPS含有吡喃环,1640,1420附近有强吸收,表明酸性基团-COOH的存在。此外,EPS在紫外270～290nm处有弱吸收峰,推测其是n-π*跃迁引起的R吸收带,说明该化合物中可能存在C=O,基本理化性质表明EPS糖醛酸含量较高,这也与红外吸收相互印证。最后利用小鼠腹腔巨噬细胞、抗原递呈专职DC细胞和T细胞的免疫活性功能对纯化多糖EPS进行深入探索。结果表明EPS可以促进巨噬细胞、DC细胞表面与抗原递呈和细胞增殖相关的marker增多,促进提高二者的增殖及抗原递呈功能。此外还可以促进巨噬细胞分泌IL-6,TNF-α,促进DC细胞分泌IL-12等肿瘤免疫因子,诱导Th细胞分化,增强其免疫抗肿瘤活性。最后,在卵清蛋白(OVA)存在下,EPS可以促进小鼠CD4+T细胞增殖,提高INF-γ水平,增强T细胞杀伤肿瘤细胞功能。
[Abstract]:The results showed that the optimal extraction scheme is that the crude polysaccharide can effectively prevent the atrophy of the immune organs of the tumor body . The results show that the optimal extraction scheme is as follows : The results showed that EPS could promote the proliferation of mouse CD4 + T cells , increase the INF - 纬 level and enhance the function of T cell killing tumor cells .
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284;R285

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