骨桥蛋白与子宫内膜癌细胞侵袭、转移的相关性研究

  本文关键词：骨桥蛋白与子宫内膜癌细胞侵袭、转移的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

《大连医科大学》 2015年

骨桥蛋白与子宫内膜癌细胞侵袭、转移的相关性研究

李英华  

【摘要】：子宫内膜癌﹙endometrial carcinoma,EC﹚是最常见的一种影响女性生殖的恶性疾病且发病率逐年升高。近年来,随着经济的发展、人们的饮食水平和生活方式的变化、非正规的激素替代治疗及滥用性激素等众多因素,导致子宫内膜癌的发生率呈明显上升趋势并且患病人群多为年轻人,成为严重威胁我国女性生殖健康的恶性肿瘤。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种具有多种生物学功能的钙结合磷酸化糖蛋白,广泛存在于人体的各个组织及体液中,与肿瘤细胞的生长增殖和侵袭转移密切相关,被认为是一种新的肿瘤标志物。研究结果表明近年来骨桥蛋白在妇科肿瘤中的功能和作用受到越来越多的重视。目的:本文选用人子宫内膜癌细胞(HEC-1A细胞),采用CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell小室实验,检测人重组骨桥蛋白(rhOPN)对HEC-1A细胞增殖能力、侵袭能力和迁移能力的影响。分析rhOPN对HEC-1A细胞MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达的影响及与相关通路分子ERK和AKT的相关性。方法:(1)采用人子宫内膜癌细胞(HEC-1A细胞)为体外模型,用不同浓度的rhOPN(0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml﹚处理细胞24h,通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验、细胞划痕实验和Transwell小室实验,检测rhOPN对HEC-1A细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力的影响。(2)Westen-blot和明胶酶谱实验检测不同浓度的rhOPN对HEC-1A细胞MMP-2蛋白表达及其活性的影响。选用浓度为300ng/ml的rhOPN与HEC-1A细胞共培养,分别在不同的时间﹙0h、4h、8h、12h、24h、48h﹚,以Westen-blot和明胶酶谱实验检测rhOPN对HEC-1A细胞中MMP-2蛋白表达及其活性的影响。(3)选用浓度为300ng/ml的rhOPN与HEC-1A细胞共培养24h,Western-blot和免疫荧光检测rhOPN对HEC-1A细胞相应通路分子E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量及定位的影响。(4)采用不同浓度的rhOPN处理细胞24h,Western-blot检测在不同浓度下rhOPN对HEC-1A细胞相关信号通路分子ERK和AKT的表达影响。然后加入相关信号通路分子的特异性抑制剂U0126(MEK1/2抑制剂﹚、LY294002﹙PI3K抑制剂﹚分别抑制HEC-1A细胞ERK和AKT的活化,Westen-blot检测MMP-2、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平的变化。结果:(1)CCK-8实验、划痕实验、Transwell小室结果显示:在rhOPN为300ng/ml时,HEC-1A细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力最强。(2)随着rhOPN浓度的增加,HEC-1A细胞MMP-2蛋白表达量逐渐上升,在rhOPN为300ng/ml处理细胞24h时,MMP-2的蛋白表达量最高。明胶酶谱实验显示:rhOPN为300ng/ml处理细胞24h时,MMP-2活性最强。(3)选取rhOPN的最佳作用条件,Westen-blot结果显示:N-cadherin、Vimentin表达最强,E-cadherin表达最弱。免疫荧光结果与空白组相比:E-cadherin、N-cadherin和Vimentin均定位在细胞膜上。(4)Westen-blot结果表明:不同浓度的rhOPN蛋白刺激细胞后,HEC-1A细胞相关信号通路分子ERK和AKT的活化均增强,分别加入以上两种信号通路分子的抑制剂,ERK1/2、AKT的活性均会受到抑制,rhOPN蛋白对HEC-1A细胞MMP-2、N-cadherin和Vimentin的表达上调作用受到不同程度的抑制,对E-cadherin的表达下调作用也受到抑制。同时明胶酶谱实验显示:MMP-2的活性均受到了不同程度的抑制。结论:(1)OPN可提高HEC-1A细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。(2)OPN可能通过活化ERK和AKT来促进HEC-1A细胞MMP-2、N-cadherin及Vimentin蛋白的表达,抑制E-cadherin蛋白的表达。

【关键词】：
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

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