杨梅素对LPS诱导的小鼠脓毒症心肌病的保护作用及机制研究

发布时间：2018-07-09 09:53

本文选题：杨梅素 + 脓毒症心肌病　；参考：《湖北科技学院》2017年硕士论文

【摘要】：背景:脓毒症是ICU(intensive care unit,ICU)患者死亡的最主要原因之一,而脓毒症导致的心功能不全(sepsis induced myocardial dysfunction,SIMD)是脓毒症患者最严重并发症之一。研究表明炎症、氧化应激和心肌细胞凋亡是SIMD发生发展三大关键因素。杨梅素(Myricetin,M)属于多酚类天然化合物,研究表明其具有抗炎、抗氧化、延缓衰老和保护心血管系统等多种药理作用。目前有关杨梅素在脂多糖诱导的小鼠脓毒症心肌病中的保护作用及机制还未见报道。目的:探讨杨梅素在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠脓毒症心肌炎模型和LPS诱导心肌细胞炎性损伤中的作用及机制,为临床治疗寻找新药。方法:1)H9C2细胞培养于37℃恒温二氧化碳培养箱,待细胞长满培养皿底部约90%面积时,用0.25%胰酶消化传代培养后加入药物干预。用CCK-8试剂盒检测杨梅素对H9C2细胞活性的影响。2)动物实验中,选择健康成年的雄性C57小鼠(体重:24-25g)100只,随机分为对照组(CON,n=25),药物组(M,200mg/kg per day,n=25),脂多糖处理组(LPS,15mg/kg静脉给药一次,n=25),LPS+M组(n=25)。M组和LPS+M组小鼠提前给予杨梅素200mg/kg/d 5天,然后给予15mg/kg的LPS静脉给药一次,12h后超声评估小鼠心功能后断椎处死小鼠,收集小鼠心脏,随机分配至组织病理组和分子生物学组。3)心脏组织冰冻切片和细胞爬片进行免疫荧光染色观察体内外NF-κB核转位;用TUNEL染色检测心脏组织和H9C2细胞凋亡情况;蛋白印记检测炎症信号通路(IκBα/NF-κB/p65)、炎症因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)和凋亡相关蛋白(Bcl2,Bax,C-Caspase3);实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应用于测定炎症相关细胞因子的m RNA表达水平;用试剂盒分离细胞核和细胞质中的蛋白用于定量检测NF-κB核转位。4)氧化应激试剂盒用于检测体内外活性氧ROS水平以及GPx和SOD酶活性。结果:1)体外毒性试验中0,5,10,20,40,80和160μM杨酶素分别处理H9C2细胞18小时,结果显示小于或等于40μM的杨梅素对H9C2细胞无毒性,不影响细胞生长;2)超声评估显示杨梅素能够显著改善脂多糖诱导的小鼠心功能损伤,表现为增加小鼠左室射血分数(EF)和短轴缩短率(FS),缩减左室舒张末期内径和收缩末期内径,增加舒张末期左心室后壁厚度和收缩末期左心室后壁厚度,缩减左室舒张末期容积和收缩末期容积,改善心脏收缩和舒张功能,减轻左室内血液潴留。3)体内外实验证实杨梅素显著抑制IκBα/NF-κB/p65信号通路的激活,表现为抑制IκBα和p65磷酸化水平的增加和p65细胞核转位;受IκBα/NF-κB/p65调控的炎症因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)表达显著降低。体内外实验证实杨梅素能够显著抑制脂多糖诱导的H9C2细胞和心肌细胞的凋亡,表现为TUNEL阳性信号的显著减少;进一步的印迹表明,杨梅素能够增强抗凋亡蛋白Bcl2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax和C-Caspase3的表达。4)体内外实验证实杨梅素显著抑制ROS的产生,恢复抗氧化酶(GPx和SOD)活性。结论:在体内外模型中证实,LPS诱导心肌细胞和心脏组织的炎症反应,表现为炎症信号通路的活化和炎症相关因子的分泌,同时氧化应激导致细胞内ROS聚积和抗氧化酶的活性降低,炎症和氧化应激促进心肌细胞凋亡和心脏功能受损;体内外给予杨梅素均能改善脂多糖诱导的炎症反应,保护小鼠心脏功能,其作用机制与杨梅素的抗炎、抗氧化和抗凋亡的作用相关。杨梅素是SIMD的潜在治疗或辅助治疗药物。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect and mechanism of Myricillin ( M ) on mice with sepsis induced by lipopolysaccharide ( LPS ) . The results showed that Yangmei could significantly inhibit the expression of NF - 魏B 伪 / NF - 魏B and the expression of anti - apoptotic proteins ( GPx and SOD ) .
【学位授予单位】：湖北科技学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】