小鼠诱导多能干细胞与PHBHHx膜体外共培养并制作心肌补片的实验研究

发布时间：2016-12-19 15:32

  本文关键词：小鼠诱导多能干细胞与PHBHHx膜体外共培养并制作心肌补片的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

《首都医科大学》 2015年

小鼠诱导多能干细胞与PHBHHx膜体外共培养并制作心肌补片的实验研究

许士俊  

【摘要】：目的:通过3-羟基丁酸与3-羟基己酸的共聚酯膜(PHBHHx膜)与小鼠诱导多能干细胞(miPSCs)体外共培养,研究这种新型的高分子材料对miPSCs粘附、存活及分化的影响;进而找到一种适合小鼠诱导多能干细胞生长、增殖及分化的高分子生物材料,制作心肌补片,作为治疗心肌梗死等疾病的新方法。方法:复苏miPSCs,传代培养后,将miPSCs与PHBHHx二维膜和PHBHHx三维膜(膜上有孔径,模仿三维空间)共培养,72小时后固定并进行扫描电镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,DAPI荧光染色观察细胞在PHBHHx膜上细胞粘附情况。用含和不含维生素C的分化培养基对其进行诱导分化,21天后通过免疫荧光、流式细胞术观察细胞分化情况,测定心肌细胞特异性蛋白cTnT和a-actinin的含量来分析PHBHHx膜对miPSCs向心肌细胞分化的影响。结果:miPSCs可以在PHBHHx膜上良好的粘附和存活,细胞在PHBHHx膜上可以保持正常形态。培养72小时后CCK-8法检测细胞活力显示,PHBHHx三维膜培养在450nm处的吸光度值为0.836±0.038PHBHHx二维膜培养吸光度值0.617±0.018传统的细胞培养皿培养0.312±0.003(p0.05)。维生素C作为一种良好的体外诱导剂,可以极大地促进miPSCs向心肌细胞分化,诱导分化21天后免疫荧光测定心肌细胞特异性蛋白cTnT表达阳性;流式细胞术测定cTnT和a-actinin均表达阳性,其中cTnT的表达量:加维生素C诱导剂组cTnT为(47.54%±1.46%)未加任何诱导剂组(7.02%±0.95%)(p0.05)。在miPSCs和PHBHHx膜共培养向心肌细胞分化过程中,在添加维生素C诱导剂的情况下,PHBHHx三维膜细胞培养分化cTnT的表达量为(60.32%±1.76%)PHBHHx二维膜细胞培养分化cTnT的表达量(53.31%±1.41%)传统的细胞培养皿培养(47.54%±1.46%)(p0.05)。a-actinin的表达量:加维生素C诱导剂组a-actinin为(48.38%±1.32%)未加任何诱导剂组(7.01%±0.87%)(p0.05)。在miPSCs和PHBHHx膜共培养向心肌细胞分化过程中,在添加维生素C诱导剂的情况下,PHBHHx三维膜细胞培养分化a-actinin的表达量(60.21%±1.58%)PHBHHx二维膜细胞培养分化a-actinin的表达量(55.40%±1.14%)传统的细胞培养皿培养(48.32%±1.32%)(p0.05)。结论:1、miPSCs与PHBHHx膜具有良好的组织相容性,可以在PHBHHx膜上粘附、增殖和分化;2、维生素C能够极大地提高miPSCs向心肌细胞分化的效率;3、通过对比PHBHHx三维膜、PHBHHx二维膜和传统的培养皿培养三种培养方式,三维PHBHHx膜培养在miPSCs的增殖以及向心肌细胞分化过程中具有很大的优势。因此,PHBHHx膜有希望作为干细胞治疗心肌梗死等疾病理想的心肌补片材料

【关键词】：
【学位授予单位】：首都医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.22
【目录】：

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