【摘要】：目的:探讨补肾益肝活血方对大鼠膝骨关节炎的疗效,以及通过病理学切片、ELISA、免疫组化评估补肾益肝活血方对关节软骨的影响。方法:首先把54只标准SD实验大鼠随机抽出9只分为空白组,剩下的45只均予以右后膝关节注射木瓜蛋白酶稀释液造模,造模完成后随机抽取造模组5只、空白组1只大鼠并处死,检测并评估造模成功后,再次将造成的KOA模型大鼠随机分为5组,分别设置为中药(补肾益肝活血方)高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组、西药双醋瑞因组(阳性对照组),每组8只。按照预先设计好的实验方法进行药物干预,药物干预期间观察并记录各组实验大鼠造模关节的局部改变及大鼠行为的变化情况。给药4周后,腹主动脉取血并采取脱颈法处死各组实验大鼠,取材后进行软骨组织切片HE染色观察、相关细胞因子检测、软骨组织免疫组化检测等:①参照文献标准对软骨组织表面进行肉眼观察及评分:实验大鼠经处死后,切开模型侧(右后)膝关节腔,请三名专业人员遵循双盲原则根据软骨的变化进行评分;②取软骨组织切片并HE染色,光镜下观察软骨组织的病理改变,按照Mankin's评分分别对其评分;③腹主动脉取血后,分离出血清,ELISA法测定各组实验大鼠血清中IL-lβ、TNF-α的含量;④取造模关节软骨组织作成切片,采取免疫组化法检测其中MMP-3、EFEMP-1的表达情况。结果:①行造模术前、后及药物干预后所造模膝关节局部的表现及变化：实验开始前所有实验大鼠膝关节外形及活动均正常,造模完成后除空白组外其余各组大鼠均表现为一定程度的造模关节活动受限、大鼠跛行、局部红肿等KOA表现,行药物干预结束后空白组大鼠膝关节较前变化不明显,给药治疗的各组大鼠造模膝关节均有一定程度的KOA表现,但均较模型组大鼠程度减轻。②通过肉眼观察,对大鼠膝关节软骨评分结果:正常组的肉眼评分要低于模型组及各药物干预组,差异(P＜0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组、中剂量组、低剂量组以及阳性对照组肉眼评分相比于模型组均较低,差异(P0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组、中剂量组以及阳性对照组肉眼评分均较补肾益肝活血方低剂量组低,差异(P0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组较阳性对照组差异不明显(P0.05),无统计学意义。③光镜切片后各组Mankin's评分结果:药物治疗各组以及模型组Mankin's评分均高于正常组,差异(P0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组、中剂量组以及阳性对照组Mankin's评分均低于模型组,差异(P＜0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组、中剂量组、阳性对照组Mankin's评分低于补肾益肝活血方低剂量组,差异(P0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组Mankin's评分较阳性对照组差异不大(P0.05),无明显统计学意义。④血清IL-1β、TNF-α指标各组之间的比较:模型组、各药物治疗组血清中IL-lβ、TNF-α含量均高于正常组,差异(P＜0.05),有统计学意义;模型组大鼠血清中IL-lβ、TNF-αα含量均较各药物治疗组高,差异(P＜0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组、中剂量组大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量较补肾益肝活血方低剂量组低,差异(P0.05),有统计学意义;阳性对照组大鼠血清中IL-lβ、TNF-α含量低于补肾益肝活血方中、高剂量组,差异(P0.05),有统计学意义。⑤免疫组化检测软骨组织中MMP-3、EFEMP-1的结果显示:在各组中,MMP-3、EFEMP-1均有不同程度阳性表达;模型组及各药物干预组MMP-3、EFEMP-1阳性表达均高于空白组,差异(P0.05),有统计学意义;MMP-3的阳性表达在补肾益肝活血方低、中、高剂量组及阳性对照组要低于模型组,差异(P0.05),有统计学意义;EFEMP-1的阳性表达在补肾益肝活血方低、中、高剂量组及阳性对照组要高于模型组,差异(P0.05),有统计学意义;补肾益肝活血中、高剂量组及阳性对照组MMP-3阳性表达低于补肾益肝活血方低剂量组,差异(P0.05),有统计学意义;补肾益肝活血中、高剂量组及阳性对照组EFEMP-1阳性表达高于补肾益肝活血方低剂量组,差异(P0.05),有统计学意义;补肾益肝活血方高剂量组和阳性对照组中MMP-3、EFEMP-1阳性表达差异(P0.05),无统计学意义。结论:① 运用关节腔注射木瓜蛋白酶方法能成功诱导大鼠膝骨关节炎模型,稳定性好。②各药物治疗组及模型组中模型侧膝关节软骨中MMP-3、EFEMP-1的阳性表达量均较正常组有变化,证明MMP-3、EFEMP-1与KOA的发生和发展有紧密关系。③补肾益肝活血方延缓软骨的退变,从而在一定程度上延缓了大鼠膝骨关节炎的病情,故补肾益肝活血方对KOA有明确的治疗效果。④补肾益肝活血方延缓软骨退变、有效缓解KOA病情的机制之一可能为分别下调和上调关节软骨中MMP-3、EFEMP-1的表达。⑤将补肾益肝活血方高剂量组与西药组(阳性对照组)中大鼠活动状态及软骨病理学切片观察结果相比较,差异无统计学意义(P0.05);在降低炎症因子方面,阳性对照组较补肾益肝活血方高、中剂量组显效稍占优,故得出高剂量补肾益肝活血方能有效治疗KOA,与双醋瑞因效果相当。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
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