探讨NF1、HMMR在肺癌患者血液及癌组织中表达的检测

发布时间：2018-10-20 13:49

【摘要】：目的:肺癌(Lung cancer)是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一,近50年来其发病率和死亡率均明显增高,我国是世界上肺癌高发地区之一。尽管如此其发病机制尚不完全明确,目前认为其病因大概可分为:烟草暴露、职业环境因素、大气污染,遗传因素等。随着对这一疾病的逐步深入了解,基于基因分子水平的研究越来越受到人们重视。一些非小细胞肺癌预后相关基因采用基因芯片技术高通量筛选,来预测非小细胞肺癌患者的总生存期,为非小细胞肺癌个体化治疗提供依据,因此基因的相关性检测逐渐被重视起来。相关研究表明,在众多肺癌相关性基因中NF1,HMMR在非小细胞肺癌患者机体中有着不同的表达,本文拟通过实验室HRM实验操作来检测非小细胞肺癌患者血液标本微量核酸提取物和组织切片标本中核酸提取物质中NF1基因和HMMR基因的表达,探讨通过该实验方法对于在非小细胞肺癌患者血液标本中与其肺癌组织蜡块中定性检测NF1、HMMR两种基因的可行性。方法:1在河北医科大学第四医院胸一科2010年9月至2015年9月在河北医科大学第四医院胸外科住院手术治疗的204例非小细胞肺癌患者中随机抽取30例肺癌患者血液标本作为血液标本组及18例患者术后肺癌组织蜡块标本作为组织蜡块组,所有患者术前均未经化疗或放射治疗,除外其它癌症患者及合并某些和血管增生相关的疾病如子宫内膜异位症;呼吸窘迫综合征;慢性心衰;慢性呼吸衰竭,糖尿病等。均为汉族以排除种族间可能存在的基因差异。且无明确致癌因素长期接触史。肿瘤的病理类型均经河北医科大学第四医院手术切除标本的病理报告确认样本。2采用实验室人血MINI BLOOD DNA技术提取标本血液中微量核酸物质作为PCR反应模板并通过HRM实验操作步骤检测其中的产物的表达,通过PCR扩增技术定性分析其产物的表达结果,以已知的两种基因序列做比对,分析患者血液标本组检测结果。3非小细胞肺癌组织切片组中同样采用hmr实验室操作以组织中的核酸提取物作为模板,检测其反应产物中表达的检测结果,比对已知的两种基因序列,判断结果中nf1基因和hmmr基因的表达。4两组的产物表达结果采用spss19.0软件并用fisher确切概率法分析探讨用该种实验方法从非小细胞肺癌患者血液与癌组织中提取微量核酸物质检测两种基因表达的可靠性。结果:1实验室方法检测nf1基因与hmmr基因在非小细胞肺癌患者血液中的表达,由于从血液标本中获取的纯化dna转录到rna做表达,rna质量较差,结果无意义。无一例检测结果阳性,建议保存组织dna或组织蜡块;2实验室方法检测非小细胞肺癌蜡块组织切片标本中nf1和hmmr基因的表达具有可行性,组织蜡块中检测基因表达阳性率为44.4%。其中nf1基因表达阳性率33.3%(6/18),hmmr基因阳性表达率38.9%(7/18)。通过实验方法对血液标本与组织蜡块标本检测结果比较,二者有显著差异(p0.05);3NF1基因在非小细胞肺癌患者组织中阳性表达与患者肺癌临床分期(肿瘤大小,淋巴结转移等)具有一定的相关性(p0.05)。结论:1本文通过在实验室hrm实验操作提取非小细胞肺癌患者血液中的微核酸物质检测nf1基因、hmmr的基因表达的可行性较差,阳性检出率为0,因由血液标本中dna做转录rna表达时不能被有效的检测,与其血液中核酸物质含量较少有密切关系。2通过该实验室方法对非小细胞肺癌组织切片组提取基因检测nf1基因与hmmr基因具有一定的可行性。通过组织蜡块与血液标本两组比较,检测非小细胞肺癌患者癌组织更适合作为检测两种基因表达的途径。3通过对小样本的结果结合患者的基本资料分析,nf1的高表达对患者预后具有一定的积极的作用。这一结果与nf1基因作为保护性基因这一结论相吻合。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

【参考文献】