肾癌索拉非尼耐药性的研究

发布时间：2018-11-20 08:54

【摘要】：目的:肾细胞癌在成人泌尿系统肿瘤较为常见,恶性程度高、预后不良,而且约莫30%的患者在初次就诊时就已发现转移。而放疗或者化疗差强人意的疗效,使手术成为肾癌目前最主要而有效的手段;然而采取手术治疗的患者,有20%-40%后期继发远处转移。癌症发生发展分子层面机理的认识越来越清晰,以特定蛋白为靶标的靶向治疗(TARGET,treatment approaches in renal cancer global evaluation trial)成为新的研究热点。以索拉非尼为例,TKI作用于VEGF,阻碍肿瘤中新血管的生成,促进细胞发生凋亡式死亡。靶向药物对肿瘤细胞的刺激会随着用药时间积累而发生质变,导致对药物抵抗耐药,从而制约了靶向治疗的应用。本课题尝试探讨肾细胞癌靶向治疗发生抵抗的机制,并探索改变其抵抗性的手段。实验选取肾癌细胞株786-0、ACHN以梯度索拉非尼浓度构建耐药株,通过对凋亡、自噬、信号通路的检测探讨可能的耐药机制,根据实验结果探索逆转耐药性的方法。方法:1.耐药株的建立:786-0、ACHN细胞株于96孔板中培养滴加不同浓度索拉非尼,采用WST-8测其IC50。随后,细胞培养时添加索拉非尼,以略低于IC50浓度开始,传代时遴选活力最强的细胞,以两代的频率梯度增加索拉非尼的浓度。在索拉非尼的有效浓度达到8 μmol/L时,保持此浓度,稳定传10代以后可认为耐药株构建成功。2.对比检测耐药株786-0-R、ACHN-R与非耐药株786-0、ACHN凋亡、自噬、Akt表达的差异,探讨耐药发生可能的机制。3.依据上一步结果,探寻逆转肾癌细胞株耐药的方法。通过与非耐药株的对比,检测其细胞的活力、凋亡、自噬水平等评估耐药性,探讨其背后的机制,验证前期研究。4.根据细胞实验的结果,进行动物实验进一步验证。构建ACHN、ACHN-R荷瘤鼠模型,2周后可初步判断植瘤成功与否。老鼠随机分为5组,对照组,耐药对照组,耐药+索拉非尼组,耐药+乌苯美司组,耐药+索拉非尼+乌苯美司组。测量老鼠肿瘤体积,评测估计乌苯美司逆转索拉非尼耐药的效用。结果:1.肾细胞癌耐药株786-0-R、ACHN-R表现为对索拉非尼抵抗,同等剂量下,786-0-R、ACHN-R具有更低的凋亡率,表明耐药株构建成功。2.786-0-R、ACHN-R自噬水平明显上升,自噬作为癌细胞的一种反应机制参与索拉非尼耐药。3.在 786-0-R、ACHN-R 中 PI3K/Akt/mT0R 转导通路过度激活,p-Akt,p-mTOR的表达显著增高。PI3K/Akt/mT0R转导通路与自噬、凋亡关系密不可分,在索拉非尼耐药发生中发挥着重要作用。4.应用乌苯美司后,Akt信号通路表达下调,与安慰剂对比,耐药株加入乌苯美司后肾癌细胞又恢复了对索拉非尼的敏感性,与单纯添加乌苯美司相比较,乌苯美司加索拉非尼的疗效明显优于单纯乌苯美司,证实并非乌苯美司改变了耐药株的抵抗性。结论:肾癌耐药细胞株对索拉非尼反应较差,WB、电镜结果显示较高的自噬水平,应用乌苯美司调节Akt信号通路抑制自噬可以逆转索拉非尼耐药,但其他靶向药物耐药、逆转耐药性的有效时间等问题需要更长时间、更大样本的后续实验。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.11

【参考文献】