黄芪当归各有效组分优化配方对IPF小鼠支气管肺泡干细胞数量的影响

发布时间：2019-04-17 11:45

【摘要】：由于近年来化学药物的大量使用、环境及空气污染的日益严重,肺间质性纤维化的发病率日趋上升,自确诊之日起患者的存活率仅为2-5年。本论文对肺纤维化从肺痿论、肺痹论、肺络论进行了相关论述,旨在较为全面的了解古人对肺病的认知及治疗经验,以求指导中医药更好的治疗肺纤维化疾病。另从实验方面,对黄芪当归各有效成分优化配方对肺细胞新生的影响进行了相关研究,通过不同的给药方案,初步找到治疗肺纤维化的最佳优化配方治疗方案,并初步探索其理论机制,为IPF的临床防治提供实验依据。理论研究理论探讨一:首先从从进化论和三胚层角度来看,肺的出现是在高等脊椎动物时期,主要由内胚层和外胚层所主;经络是按照脾肺胃胆等顺序逐条进化,由中胚层演化而来,有力印证了肺合皮毛、起于中焦还循胃口的科学性。从文献学角度来讲,肺络早在《内经》即有出现,且散在于《临证指南医案》、《医门法律》等著作中,其功能贯通营卫、溢奇邪,渗灌气血,在肺的功能中起着举足轻重的作用。肺心经络相连、气血相依,若心火亢胜灼肺可导致肺痿,故提出肺纤维化病机为心火灼肺、阴虚络瘀,为中医防治肺纤维化提供新的理论思路。理论探讨二:中医没有与肺纤维化相对应的病名,历代医家多以肺痿、肺痹论之,自叶天士提出肺络之后,近代医家关于肺纤维化隶属肺络的理论研究日趋完善,故本论文从《黄帝内经》、《伤寒杂病论》、《景岳全书》等古代书籍以及近代文献出发,综合阐述肺纤维化与肺痿、肺痹、肺络在病名、病因病机及治疗方药等相关方面的关系。实验研究动物模型与给药方法:SPF级雄性ICR小鼠105只,体重18-20g,来源于北京斯贝福实验动物科技有限公司[发货单号11401500007203,许可证号SCXK(京)2011-0004]。实验动物饲养在避光、安静且温暖的清洁级动物房,喂养3天以使其适应坏境,实验期间小鼠自由进食与饮水。随机分为7组,即正常组、模型组以及5个黄芪当归组分优化各方治疗组(即优化方1组、优化方2组、优化方3组、优化方4组、优化方5组),每组编号1-15。观察记录小鼠生存状态及死亡情况,21天后取肺组织及血清备用。进行以下实验。实验一:黄芪当归各有效组分优化配方对肺纤维化小鼠生存状态及形态学的影响。观察小鼠体重变化,描绘小鼠死亡率曲线,用HE染色和苯胺蓝染色法观察IPF小鼠肺组织形态学变化。结果显示,黄芪当归各有效成分优化配方治疗对提高小鼠生存状态和生存率有一定帮助,均能降低小鼠死亡率,且以优化1方和优化5方效果较明显。病理形态学显示,与模型组比较,中药治疗组均有不同程度的改善,且以优化1方组肺泡组织增生改善明显,肺泡结构已基本恢复,炎性渗出明显减少,说明治疗效果显著;优化方3、5组肺纤维化病灶也有所改善。实验二:黄芪当归各有效组分优化配方对肺纤维化小鼠羟脯氨酸及胶原蛋白的影响。采用碱水解法测定IPF小鼠肺组织匀浆液中羟脯氨酸含量;采用RT-PCR法测定肺组织中TGF-β、VEGF、Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型胶原基因表达水平。HYP含量结果显示,模型组优方2组优方5组优方4组优方1组优方3组正常组,从统计学结果来看优方3组和优方1组更有显著性意义。从各胶原基因表达水平来看,与正常组相比,模型组TGF-β、VEGF基因表达水平均有所升高,Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型胶原基因表达水平都有增高,可能是导致肺中胶原含量最终升高的原因之一。中药治疗优化各组都能不同程度的下调肺中TGF-β、VEGF、Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型胶原基因表达水平,且以优化方1组综合效果较好。实验三:黄芪当归各有效组分优化配方对IPF小鼠支气管肺泡干细胞的影响。在实验一、二的基础上,选取最优组即优化方1组,与正常组、模型组一起进行肺上皮制备,BASCS染色,以及流式细胞仪对肺组织中Sca-1、EPCAM进行检测。结果显示,与正常组相比,模型组基因含量Q2有所下降,与模型组相比,优化方1组基因含量Q2明显升高,可能与黄芪当归有效组分配方可以促进肺纤维化小鼠支气管肺泡干细胞数量有关。结论:优化方1组为最佳治疗组,即黄芪水提物与当归醇提物比重较大,且二者比例接近1:1时,对肺纤维化的防治效果最佳,其他比例优化组都不是最佳的方案选择。并与降低肺中羟脯氨酸的含量,抑制肺中TGF-β基因、VEGF、Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型胶原基因正常表达,促进肺中细胞Sca-1、EPCAM,增加支气管肺泡干细胞数量有关,但其具体机理还有待进一步研究。
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【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】