护肝片对比格犬体内他克莫司药动学的影响及其四种有效成分同时测定

发布时间：2019-05-09 17:37

【摘要】：肝移植是目前解决终末期肝病的唯一有效手段。受者术后需常规服用他克莫司等免疫抑制剂来预防排斥反应。他克莫司为新型钙调磷酸酶抑制剂,因免疫抑制作用强大、不良反应较少而成为指南推荐的一线用药。他克莫司治疗窗窄,口服生物利用度个体差异大,需常规进行血药浓度监测。护肝片由柴胡、茵陈、板蓝根、五味子、猪胆粉、绿豆六味中药材组成,具有保肝、疏肝理气、健脾消食、降低转氨酶的作用。肝移植受者常合并服用护肝片,在进行他克莫司血药浓度监测及随访时我们发现,加服护肝片后肝移植受者他克莫司稳态谷浓度明显升高。那么,护肝片与他克莫司是否存在药物相互作用呢?由于肝移植受者用药种类繁多,直接对肝移植受者进行研究存在其它成份的干扰以及伦理等方面的限制,因此本课题拟在比格犬体内研究护肝片对他克莫司药动学的影响,同时建立护肝片中多种成分同时测定方法,为进一步研究他克莫司对护肝片药动学影响提供实验依据,为临床合理用药提供参考。第一部分护肝片对比格犬体内他克莫司药动学的影响目的:研究合用护肝片对比格犬体内他克莫司药动学的影响,初步观察两药是否存在药物相互作用。方法:试验分两组,对照组(n=6):单服他克莫司,试验组(n=6):他克莫司合用护肝片。采用自身前后对照试验,每只比格犬口服给予1粒他克莫司,一周后同时给予1粒他克莫司和2片护肝片。给药前禁食12 h,期间自由饮水。于给药前(0 h)及给药后0.167,0.333,0.5,0.667,0.833,1,1.5,2,3,4,6,8,12,24 h于后肢小隐静脉取血1 m L,置于2 m L EDTA K2抗凝管中,待测。采用化学发光微粒子免疫法测定他克莫司全血浓度。将不同采血点血药浓度数据,采用DAS(2.1.1版)软件进行处理,计算他克莫司的主要药代动力学参数:药-时曲线下面积AUC0-t和AUC0-∞、消除半衰期t1/2、达峰时间T max、达峰浓度C max、表观分布容积V/F、清除率CL/F。应用SPSS 21.0统计软件处理两组间他克莫司血药浓度及药动学参数数据,计量资料以均数±标准差表示,组间比较采用配对t检验,P0.05为差异具有统计学意义。结果:合用护肝片前后他克莫司的主要药动学参数:AUC0-24h分别为(54.23±33.95)和(74.54±32.85);t1/2分别为(13.84±9.05)和(8.71±4.49)h;T max分别为(0.72±0.40)和(0.86±0.37)h;C max分别为(17.17±7.80)和(22.93±8.10)μg·L-1;CL/F分别为(2.22±1.67)和(1.42±0.67)L·h-1;V/F分别为(37.54±24.77)和(17.50±11.82)L。与单服他克莫司相比,合用护肝片后他克莫司的AUC0-24h和C max分别增加37.5%和34%,CL/F和V/F分别降低36%和53%,差异具有统计学意义(P0.05)。t1/2变短,T max延迟,差异不具有统计学意义(P0.05)。结论:护肝片能提高比格犬体内他克莫司全血血药浓度和生物利用度,降低药物清除率和表观分布容积。第二部分高效液相色谱波长切换法同时测定护肝片中绿原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量目的:建立同时测定护肝片中绿原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素含量的高效液相色谱法,以期为进一步研究他克莫司对护肝片药动学影响提供基础研究依据。方法:护肝片除去包衣,研细,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25 m L,超声提取30 min,过滤,注入色谱系统。采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以0.2%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,B为13%;5~15 min,B为13%~55%;15~23 min,B为55%~62%;23~25 min,B为62%~70%;25~29 min,B为70%~75%;29~35 min,B为75%;35~35.10 min,B为75%~13%;35.10~45min,B为13%),流速为1.0 m L·min-1,柱温:35℃,检测波长:0~6 min为327 nm;6~16 min为380 nm;16~45 min为250 nm,进样量:10μL。结果:建立高效液相色谱波长切换法同时测定护肝片中绿原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法,绿原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素与其他成分分离良好,杂质干扰少,分离度均大于1.5。保留时间分别为4.02 min(4.35 min)、18.29 min、29.32 min和31.29 min。绿原酸标准曲线方程为Y=28.26330X+24.9888,r=0.99939(n=5),线性范围为4~100μg·m L-1;五味子醇甲标准曲线方程为Y=21.21935X-8.43444,r=0.99994(n=5),线性范围为4~100μg·m L-1;五味子甲素标准曲线方程为Y=20.07794X-2.83327,r=0.99993(n=5),线性范围为1~25μg·m L-1;五味子乙素标准曲线方程为Y=17.76046X-2.51254,r=0.99992(n=5),线性范围为2~50μg·m L-1。绿原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的精密度试验RSD值(n=6)分别为0.32%,0.58%,0.14%,0.12%;重复性试验RSD值(n=6)分别为1.03%,0.82%,0.91%,0.53%;稳定性试验RSD值(n=6)分别为0.94%,0.31%,0.77%,0.21%;平均加样回收率分别为103.24%,101.21%,101.01%,98.77%,RSD值(n=6)分别为2.09%,1.66%,1.77%,1.48%。结论:建立了高效液相色谱波长切换法同时测定护肝片中绿原酸、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量测定方法,该方法准确、快捷、可靠,为进一步研究他克莫司对护肝片药动学影响打下实验基础。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】