木犀草素通过JNK通路对人肺癌细胞H460生长抑制和促进凋亡机制探讨

发布时间：2019-10-09 04:31

【摘要】：研究目的和意义:研究国内学者周仲瑛提出的药方"周氏克金岩方"中的成分木犀草素(Luteolin)对人肺癌细胞生长抑制的效果并揭示出其作用机制,为肿瘤药物的研发寻找新的方向。研究方法:在体外环境下培养人肺癌细胞H460,用DMSO溶液将木犀草素分别稀释成浓度为10μM、15μM、20μM、25μM、30μM的溶液,加药后,通过CCK8检查肺癌细胞生长状况,通过流式细胞仪检查细胞周期以及细胞凋亡情况,PCR芯片检测肺癌基因表达变化,WesternBlot 检测对周期相关蛋白 DUSP6,DLC-1,JNK1,P-JNK1,CYD1P1,EGFR,ERBB2,PAK1,C-jun,NCK1,MEKK1 表达的影响。研究结果:CCK8检查结果表明,木犀草素能够有效地阻碍人肺癌细胞的增殖,阻碍作用的强弱和浓度、时间有关,木犀草素溶液对H460细胞在10μM,15μM,20μM,25μM,30μM浓度时分别作用24h,36h和48h后,其OD值与对照组相比均有显著差异。流式细胞仪分析结果显示:人肺癌细胞经木犀草素作用36h后,处于S期的细胞比例增多,G1和G2期细胞比例减少。和木犀草素接触24h后,处于S期的细胞比例增多。说明细胞在木犀草素作用下在S期发生阻滞,并且呈浓度相关性。Annexin V测定结果表明,木犀草素作用24h后,处于Q2期(晚期凋亡)的H460细胞比例增加,人肺癌细胞H460经木犀草素作用36h后,Q3(早期凋亡)比例增加,成浓度依赖性。芯片结果显示,有5个符合条件并且表达较好的蛋白,分别是CYP1B1,DLC-1,EGFR,DUSP6,ERBB2。Westernblot结果显示木犀草素作用于H460细胞36h后,DUSP6,DLC-1,P-JNK1 等蛋白的表达增强,CYD1P1,EGFR,ERBB2,NCK1,MEKK1,PAK1等蛋白的表达降低,且均呈剂量依赖性。JNK1与C-JUN蛋白表达没有明显变化。研究结论:木犀草素能明显抑制人肺癌细胞H460的增殖,并且将细胞周期阻滞在S期,促进H460的凋亡,其机制可能和JNK通路的激活密切相关。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

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本文编号：2546598