CLIC1调控细胞内ROS参与宫颈癌SiHa细胞迁移与侵袭

发布时间：2020-11-18 12:44

　　 目的:宫颈癌由于其高发病率和和转移率一直在女性恶性肿瘤中占据一席之地,明确宫颈癌细胞的转移扩散机制对于其临床策略的探索有着非比寻常的意义。细胞内氯离子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)在恶性肿瘤进展过程中发挥的作用已被国内外多项研究所证实,但具体功能和机制仍不清楚。畸形血管系统是恶性肿瘤所具有的普遍特征,这种异常的血管系统使得肿瘤细胞周围生长环境发生慢性改变,最终形成一种长期持续的缺氧-再加氧(hypoxia-reoxygenation,H-R)环境。而这一转变所带来的最直接的结果就是肿瘤细胞中活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)的提升,肿瘤细胞的恶性表型在ROS作用下发生转变,进一步加速肿瘤的恶性进展过程。本研究观察缺氧-再加氧环境中CLIC1对宫颈癌SiHa细胞内ROS水平的影响,进而对宫颈癌的进展机制进行探讨。方法:通过物理条件构建宫颈癌SiHa细胞H-R模型和常氧模型;对不同培养环境中的SiHa细胞给予IAA94(CLIC1特异性抑制剂,20μmol/L)、DPI(NADPH氧化酶抑制剂,15μmol/L)、NAC(抗氧化剂,20 mmol/L)药物处理,各组细胞中CLIC1蛋白的相对表达量通过Western-blot方法检测;不同药物处理后SiHa细胞内ROS含量使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针试剂盒检测;利用划痕实验及细胞侵袭实验观察常氧及H-R条件下各组细胞迁移及侵袭能力的改变。获取数据通过SPSS22.0软件完成最终分析处理。结果:1.Western-blot方法测得H-R组CLIC1蛋白的相对表达量(3.57±0.03)显著高于常氧组(1.00±1.18)(P0.01),H-R+IAA94组细胞中CLIC1蛋白的相对表达量(2.39±0.01)明显低于H-R组(3.57±0.03)(P0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞中CLIC1蛋白的相对表达量(2.83±0.03、2.85±0.02)明显低于H-R组(3.57±0.03)(P0.01)。2.荧光探针技术检测各组SiHa细胞内ROS含量的结果显示,相对于常氧组,缺氧再加氧条件下培养的SiHa细胞内ROS的相对含量出现增加(P0.01),而与H-R组相比,H-R+IAA94组细胞内ROS的相对含量则出现了降低(P0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞内ROS的相对含量也低于H-R组(P0.01)。3.细胞划痕实验测得H-R组SiHa细胞的划痕愈合面积(61.76±0.52)明显高于常氧组(41.94±1.18)(P0.01),H-R+IAA94组细胞的划痕愈合面积(50.53±3.18)低于H-R组(61.76±0.52)(P0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞的划痕愈合面积(49.34±2.15、49.21±3.13)明显低于H-R组(61.76±0.52)(P0.01)。4.细胞侵袭实验结果表明相比于常氧组(46.60±6.19),H-R组SiHa细胞的侵袭个数(91.80±10.96)明显增多(P0.01),H-R+IAA94组细胞的侵袭个数(69.20±9.88)较H-R组(91.80±10.96)较少(P0.01),H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞的侵袭个数(65.20±9.58、64.40±6.80)也明显少于H-R组(91.80±10.96)(P0.01)。结论:CLIC1在缺氧-再加氧环境中可通过上调细胞内ROS参与宫颈癌SiHa细胞的迁移和侵袭过程,促进宫颈癌进展。以CLIC1和ROS作为相关药理学靶点的临床策略可能为宫颈癌治疗提供希望。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

山西医科大学硕士学位论文72结果2.1H-R条件上调SiHa细胞CLIC1蛋白的表达Western-Blot方法检测经过不同药物处理后SiHa细胞中CLIC1蛋白的表达量发现，H-R环境下SiHa细胞中CLIC1蛋白的表达较常氧环境下出现较大幅度的增加（P<0.01）；而使用IAA94处理后，细胞内CLIC1蛋白含量较H-R组有所降低（P<0.01）（表2-1，图2-1）。表2-1不同药物处理对SiHa细胞CLIC1蛋白表达的影响*：与N组相比，P<0.01；#*：与H-R组相比，P<0.01*：与N组相比，P<0.01；#*：与H-R组相比，P<0.01图2-1不同药物处理对SiHa细胞CLIC1蛋白表达的影响（相对β-actin）CLIC1蛋白相对表达量F值PN组1.00±1.185925.78>0.05H-R组3.57±0.03*<0.01H-R+IAA94组2.39±0.01#*<0.01H-R+DPI组2.83±0.03#*<0.01H-R+NAC组2.85±0.02#*<0.01

山西医科大学硕士学位论文82.2H-R条件下CLIC1上调SiHa细胞ROS水平实验发现H-R组SiHa细胞的荧光强度高于N组，表明H-R环境中SiHa细胞的ROS含量相比于常氧环境更高（P<0.01）。而在IAA94的阻滞作用下，随着CLIC1通道活跃程度的降低，SiHa细胞内的ROS水平也显现出类似的下降趋势（P<0.01）。与H-R组相比，H-R+DPI组和H-R+NAC组细胞内ROS含量也出现了明显降低（P<0.01）（表2-2，图2-2）。表2-2H-R对SiHa细胞内ROS的影响*：与N组相比，P<0.01；#*：与H-R组相比，P<0.01*：与N组相比，P<0.01；#*：与H-R组相比，P<0.01图2-2H-R对SiHa细胞内ROS的影响2.3H-R条件下CLIC1增强SiHa细胞迁移能力细胞划痕实验结果显示H-R组细胞迁移能力与N组相比出现明显提升（P<0.01）；与H-R组相比，经过一定浓度的IAA94、DPI、NAC处理后置于H-R环境下培养的SiHa细胞的迁移能力则出现下降（P<0.01），表明这种增强的迁移能力可被IAA94、DPI以及NAC所抑制（见表2-3，图2-3）。荧光强度（FI）F值PN组537±14.4256600.04>0.05H-R组27815±127.64*<0.01H-R+IAA94组16079±49.12#*<0.01H-R+DPI组9298±46.16#*<0.01H-R+NAC组9108±77.58#*<0.01

山西医科大学硕士学位论文9表2-3H-R对SiHa细胞划痕愈合面积的影响（%）*：与N组相比，P<0.01；#*：与H-R组相比，P<0.01*：与N组相比，P<0.01；#*：与H-R组相比，P<0.01图2-3H-R对SiHa细胞划痕愈合面积的影响（%）2.4H-R条件下CLIC1增强SiHa细胞侵袭能力我们的实验结果表明，H-R环境下培养的SiHa细胞侵袭能力较N组明显增强（P<0.01）。而与H-R组相比，经过IAA94（20μmol/L）处理后，SiHa细胞侵袭数明显减少，H-R+DPI组和H-R+NAC组的SiHa细胞侵袭能力较H-R组也有所下降，差异均具有显著性（P<0.01）（见表2-4，图2-4）。表2-4H-R对SiHa细胞侵袭的影响细胞侵袭数F值PN组46.60±6.1916.57>0.05H-R组91.80±10.96*<0.01H-R+IAA94组69.20±9.88#*<0.01H-R+DPI组65.20±9.58#*<0.01H-R+NAC组64.40±6.80#*<0.01*：与N组相比，P<0.01；#*：与H-R组相比，P<0.01划痕愈合面积（%）F值PN组41.94±1.1829.14>0.05H-R组61.76±0.52*<0.01H-R+IAA94组50.53±3.18#*<0.01H-R+DPI组49.34±2.15#*<0.01H-R+NAC组49.21±3.13#*<0.01
【参考文献】

相关硕士学位论文 前2条

1 贾小妮;宫颈癌中CLIC4、TGF-β1和α-SMA的表达及意义[D];郑州大学;2017年

2 王宏伟;CLIC4介导的成纤维细胞向肌成纤维细胞转化与结直肠癌转移关系的研究[D];南方医科大学;2012年

本文编号：2888730