Chk1和Chk2在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达水平及意义的研究

发布时间：2020-11-19 22:44

　　 目的:研究急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)患儿初诊时骨髓标本中细胞周期检查点激酶1(checkpoint kinase 1,Chk1)和细胞周期检查点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)的相对表达水平,分析Chk1和Chk2在儿童ALL中与临床特征、早期疗效及临床危险度分层等指标的相关性,探讨两者在儿童ALL发病中的临床意义。方法:选取自2017年11月至2019年11月深圳市儿童医院血液肿瘤科收治的ALL患儿83例,其中B-ALL患儿68例,T-ALL患儿15例,同时选取12例免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenic purpura,ITP)作为对照组,采集病例组和对照组患儿的骨髓标本并分离提取白细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)的方法分别检测初诊病例组和对照组骨髓标本的Chk1和Chk2 mRNA相对表达水平,利用2~(-(35)(35)Ct)法分析和描述ALL患儿Chk1和Chk2相对表达水平,并对其相对表达水平与临床指标的相关性进行分析研究。结果:1.Chk1在初诊ALL总体患儿中表达水平为[1.677(0.688,2.502)],显著高于对照组[0.273(0.159,0.512)],差异有统计学意义(P0.05),但B-ALL与T-ALL患儿之间Chk1表达水平无统计学差异(P0.05)。2.Chk1表达水平在不同临床危险度分层具有统计学差异(P0.05),高危组患儿表达水平最高[2.441(1.608,5.502)],中危组次之[1.953(0.749,2.447)],低危组最低[0.975(0.205,1.866)]。3.Chk1表达水平与ALL患儿年龄、初诊骨髓原幼淋巴细胞比例有具有相关性(r值分别为0.243、0.269,P值均0.05)。4.Chk2在初诊ALL总体患儿中表达水平为[1.395(0.746,2.536)],高于对照组[0.228(0.185,1.416)],差异有统计学意义(P0.05),但B-ALL与T-ALL患儿中Chk2表达水平无统计学差异(P0.05)。5.Chk2与临床危险度分层相关,在高危组患儿表达水平最高[2.727(1.259,3.698)],中危组次之[1.403(0.744,2.019)],低危组最低[0.833(0.715,1.948)],但仅在高危组与低危组、高危组与中危组存在统计学差异(P0.05)。6.ALL患儿中Chk1与Chk2表达水平变化趋势一致,呈正相关关系(r=0.467,P0.001)。结论:1.Chk1、Chk2在儿童ALL中表达水平明显升高。2.Chk1、Chk2的表达水平与儿童ALL临床危险度分层有关,可能是不良预后的标志物。3.Chk1、Chk2表达失调可能在儿童ALL的发生发展中发挥作用。
【学位单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R733.71
【部分图文】：

遵义医科大学硕士学位论文刘继敏19表2-5ALL患儿临床特征与Chk1和Chk2表达的相关性Tab.2-5CorrelationbetweenclinicalfeatureofALLchildrenandChk1andChk2expressionChk1Chk2r值Pr值P性别-0.0400.7190.0550.621年龄（月）0.2430.034*0.1400.228WBC（109/L）-0.0990.382-0.0240.830HB（g/L）-0.0640.5700.0200.858PLT（109/L）-0.0670.5520.0360.752外周原幼细胞（%）0.1600.181-0.0950.429骨髓原幼细胞（%）0.2690.028*0.0750.522注：*表示P＜0.052.5儿童ALL中Chk1与Chk2相对表达水平的关系在83例ALL患儿中Chk1相对表达水平为[1.677（0.688，2.502）]，Chk2相对表达水平为[1.395（0.745，2.536）]，采用Spearman等级相关性分析，结果显示，Chk1与Chk2表达水平之间存正相关关系（r=0.467，P0.001）（见图2-6）。图2-1Chk1和Chk2相对表达水平的的相关性散点图Fig.2-1CorrelationscatterdiagramofChk1andChk2expression

遵义医科大学硕士学位论文刘继敏202.6Chk1和Chk2基因的相对表达水平的检测结果采用RT-qPCR的方法进行扩增，使用LightCycler480Ⅱ自带定量分析软件中相对定量分析法进行测定Chk1、Chk2与内参基因β-actin的相对表达水平。首先可以通过扩增曲线判断扩增效果，图中可以看到，扩增曲线均达平台期，表明均为有效扩增、扩增效果良好（图2-2、图2-3）。图2-2目的基因Chk1扩增曲线图图2-3目的基因Chk2扩增曲线图为验证扩增产物的特异性，对得到的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，可见Chk1及Chk2基因的目的条带均位于在100bp-200bp之间（图2-4、图2-5），据两者引物设计可知，是所需要的目的基因，具有特异性。图2-4目的基因Chk1扩增产物电泳图图2-5目的基因Chk2扩增产物电泳图Fig.2-5ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk2Fig.2-4ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk1Fig.2-3AmplificationcurveoftargetgeneChk2Fig.2-2AmplificationcurveoftargetgeneChk1

遵义医科大学硕士学位论文刘继敏202.6Chk1和Chk2基因的相对表达水平的检测结果采用RT-qPCR的方法进行扩增，使用LightCycler480Ⅱ自带定量分析软件中相对定量分析法进行测定Chk1、Chk2与内参基因β-actin的相对表达水平。首先可以通过扩增曲线判断扩增效果，图中可以看到，扩增曲线均达平台期，表明均为有效扩增、扩增效果良好（图2-2、图2-3）。图2-2目的基因Chk1扩增曲线图图2-3目的基因Chk2扩增曲线图为验证扩增产物的特异性，对得到的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，可见Chk1及Chk2基因的目的条带均位于在100bp-200bp之间（图2-4、图2-5），据两者引物设计可知，是所需要的目的基因，具有特异性。图2-4目的基因Chk1扩增产物电泳图图2-5目的基因Chk2扩增产物电泳图Fig.2-5ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk2Fig.2-4ElectrophoretogramofamplificationproductoftargetgeneChk1Fig.2-3AmplificationcurveoftargetgeneChk2Fig.2-2AmplificationcurveoftargetgeneChk1
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本文编号：2890544