KLF5及其去乙酰化在Barrett食管形成中的机制研究

发布时间：2020-11-20 02:31

　　 背景与目的:Barrett食管(BE)是指食管的一种病理现象,其中伴肠上皮化生者属于食管腺癌的癌前病变。肠化相关因子CDX2在Barrett食管中表达增高,同时KLF5在Barrett食管中存在异常去乙酰化状态,本文旨在探讨转录因子KLF5的异常去乙酰化状态对Barrett食管形成的影响。方法:使用qRT-PCR、western blot和免疫组化法检测BE组织中KLF5的表达,免疫共沉淀检测乙酰化KLF5的表达。采用qRT-PCR和western blot检测人鳞状上皮细胞HET-1A在酸和/或胆汁酸混合物的作用下IL-6、STAT3、KLF5、CDX2的表达。然后在酸和/或胆汁酸混合物的作用下转染KLF5 siRNA于HET-1A细胞,western blot检测KLF5、CDX2蛋白的表达。将STAT3过表达质粒、STAT3-siRNA转染人鳞状上皮细胞HET-1A细胞,采用western blot技术检测细胞内STAT3蛋白、KLF5蛋白表达水平的改变。在HET-1A细胞中转染KLF5过表达质粒,检测KLF5、CDX2蛋白的表达。转染HDAC1过表达质粒、P300过表达质粒于HET-1A细胞,检测乙酰化KLF5的蛋白表达水平。结果:与对照组相比,BE组织中IL-6、STAT3、KLF5、CDX2、HDAC1 mRNA和蛋白表达均升高,但是乙酰化KLF5水平降低。发现HET-1A细胞在酸和/或胆汁酸混合物的作用下IL-6、STAT3、KLF5、CDX2表达增高,同时组蛋白去乙酰化酶HDAC-1表达也增加。KLF5 siRNA可抑制酸和胆汁酸混合物所致的HET-1A细胞CDX2表达。Western blot结果发现STAT3过表达质粒转染HET-1A细胞后,KLF5表达也上升;而通过siRNA沉默HET-1A细胞STAT3表达后,则能够抑制细胞内KLF5蛋白的表达。在HET-1A细胞中通过KLF5过表达质粒上调KLF5,对CDX2表达无影响。在HET-1A细胞中通过转染HDAC1过表达质粒后,使用免疫共沉淀及western blot显示HDAC1蛋白表达增加,同时后乙酰化的KLF5水平下降,提示HDAC1表达增高可抑制KLF5的乙酰化。然后转染P300过表达质粒后,在P300表达上升的同时,乙酰化的KLF5水平增加。结论:在Barrett食管中,STAT3可调控KLF5的表达,KLF5可能为IL-6/STAT3与CDX2之间的桥联分子。KLF5表达增高及其异常去乙酰化状态可能是其调控鳞状上皮细胞表达CDX2的关键环节,从而促进了Barrett食管(BE)的形成。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R571
【部分图文】：

重庆医科大学硕士研究生学位论文192结果2.1研究表明KLF5、IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中均高表达（1）检测人BE组织中KLF5的表达。采用免疫组化法和qPCR检测KLF5在BE中的表达，发现BE中的KLF5表达高于邻近正常食管组织(图1)。图1A:免疫组化：KLF5在BE中比邻近正常食管表达高a:BE;b:邻近正常食管（×200）B:qPCR：KLF5在BE中表达增高Figure1A:Immunohistochemistry:KLF5isexpressedhigherinBEthanadjacentnormalesophagusa:BE;b:adjacentnormalesophagus(×200)B:qPCR:KLF5isincreasedinBE

重庆医科大学硕士研究生学位论文20（2）采用qPCR检测IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中的表达，发现BE中的IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1表达高于邻近正常食管组织(图3)。图2qPCR检测的熔解曲线和扩增曲线Figure2MeltingcurveandamplificationcurvedetectedbyqPCR图3BE与邻近正常食管中IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1mRNA的表达Figure3ExpressionofIL-6,STAT3,CDX2,HDAC1mRNAinBEandadjacentnormalesophagus

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本文编号：2890806