聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸跨Caco-2细胞单层的转运机制

发布时间：2020-12-04 23:10

　　海藻酸钠降解得到的聚甘露糖醛酸（Polymannuronic acid,PM）和聚古罗糖醛酸（Polyguluronic acid,PG）具有优良的生物活性。二者生物活性的发挥与其给药方式密切相关,而口服给药系统是各种给药途径中最广泛使用的方式,因此阐明PM和PG的口服转运过程对其生物活性的发挥具有重要意义。药物的口服转运途径主要包括跨细胞途径和细胞旁途径:多糖由于分子量（Molecular weight,Mw）大,难以透过细胞间的紧密连接（Tight junction,TJ）,因此细胞旁途径严重限制了其口服转运过程。而多糖的跨细胞途径包括:从顶膜内吞的多糖分子在细胞中内化,并最终从基底外侧膜中胞吐。为了研究PM和PG的口服转运机制,本实验采用异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate,FITC）标记的方法合成FITC-PM和FITC-PG,然后在Caco-2细胞单层模型上研究了二者的转运机制。具体研究内容包括以下几个方面:1、PM和PG的荧光标记及验证采用酪胺化学修饰与FITC缀合的方法合成FITC-PM和F.ITC-PG,琼脂糖凝胶电泳法和荧光分光光度计法... 

【文章来源】： 王宇 山东大学

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１琼脂糖凝胶电泳图谱

Ｍ．?｜?ＷＯ．??ｉ?ｉ?ｊ??１０－?￣?２５－?！〇〇■??２ＩＮＩ?３（ＭＩ?４００?５ＷＩ?ＭＭＩ?７？Ｉ０?ＭＩＩＯ?３〇〇?４〇〇?５〇〇?６００?７００?８００?２００?３００?４００?５００?６００?７００?８００??Ｗｎｖｒｌｅ？Ｋｌｈ?（ｒｎｎ）?（ｍｍ）??ｓ??４００－??ｉ?３００－??＇明??０?ｉ?．?１?ｒ－＂—Ｉ?ｒ－??２００?ｍ?？？〇〇?？〇〇?ｍ?？〇〇?ｔｏｏ??＞Ｖａｖｃｌｅｎｇ［（ｌｉ?（ｎｍ）??图２－２通过荧光分光光度法验证ＰＭ和ＰＧ的荧光标记。激发波长为４９５ｎｍ下未标记的??ＰＭ?（ａ）?．?ＦＩＴＣ?和未标记的?ＰＭ?（ｂ）?，?ＦＩＴＣ－ＰＭ?（ｃ）?，?ＰＧ?（ｄ），ＦＩＴＣ?和未标记的?ＰＧ?（ｅ），??Ｆ１ＴＣ－ＰＧ?（ｆ）和Ｆ１ＴＣ?（ｇ）的荧光光谱。??２．３．３焚光标记前后分子量的测定结果??通过酪胺化学修饰然后与ＨＴＣ缀合来成功合成了?ＦＩＴＣ－ＰＭ和ＦＩＴＣ－ＰＧ，??之后用高效凝胶渗透色谱法测定了荧光标记前后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ变化情况。??Ｍｗ测定的结果表明，标记后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ都稍微增大（图２－３?（ａ－ｄ）），这??表明可能有少量的酪胺和ＦＩＴＣ基团已缀合到ＰＭ和ＰＧ分子上。??１５??

ａ??ｍＡＵ??：：?Ａ??３０?－?Ｉ?人??ｌ?Ｍ＇?ｉ?！??〇－??－—二?＾??０?５?１０?１５?酬??ｂ?Ｐ＼１．Ｍｗ－１６．４５ｋＤ??ｍＡＵ?１?ｊｓ??，；ｊ??ｒｔ?＜５?ｍ?ｉｒ?ｍｉｎ??Ｆ１ＴＣ－ＰＭ：?Ｍｗ－１６．８０ｋＤ??１??０?ｓ?１０?ｍｉｎ??ＰＧ；?Ｍｗ＊＝?１０．６５?ｋＤ??ｄ??Ｌ?Ａｎ??丨丨?５?ｉｏ?ｉｓ?ｍｉｎ??ＨＴＣ－ＰＧ：?Ｍｗ＝１１．８９ｋＤ??图２－３通过高效凝胶渗透色谱法测定Ｍｗ。Ｍｗ测定ＰＭ?（ａ），?ＦＩＴＣ－ＰＭ?（ｂ），ＰＧ?（ｃ），??ＦＩＴＣ－ＰＧ?（ｄ）；葡聚糖的回归方程为?ｌｏｇＭｗ＝－０．４２０７ｔ?＋?８．９９５９?（Ｒ２?＝?０．９９９９）。??２．３．４荧光标记率的测定结果??最后测定了?ＦＩＴＣ－ＰＭ和ＦＩＴＣ－ＰＧ的荧光标记率ＲＬ?（％）。结果如表２－２所??示，本实验使用了商品化的ＦＩＴＣ－转铁蛋白和ＦＩＴＣ－葡聚糖作为阳性对照，并测??定了它们的平均荧光标记率Ｒｌ?（％），分别为９８．４９％和５２．５１°／。。而ＦＩＴＣ－ＰＭ和??ＦＩＴＣ－ＰＭ的平均荧光标记率ＲＬ?（％）较低，仅为１２．６６％和９．５２％，这与高效液??相色谱法测定的荧光标记后Ｍｗ的稍微增大结果相一致，因为仅有少量的酪胺和??ＦＩＴＣ缀合到ＰＭ和ＰＧ分子上。上述结果表明，ＰＭ和ＰＧ已成功被ＦＩＴＣ标记，??可用于后续实验。??１６??


本文编号：2898399