N-cadherin牵拉张力调控肺腺癌侵袭转移的物理机制研究

发布时间：2020-12-07 02:00

　　目的:肿瘤细胞的侵袭转移是临床肺腺癌治疗的难点,其抑制对改善恶性肺肿瘤预后不良至关重要。肿瘤的运动与细胞力学活动密切相关,而其如何调控肺肿瘤的侵袭转移目前并不清楚。方法:本研究采用划痕实验和transwell实验验证了肺腺癌细胞A549侵袭转移模型;依据FRET原理,构建了从细胞骨架连接至细胞膜依次为β-actin、β-catenin、N-cadherin的三种荧光张力探针,利用这三种探针检测了细胞内张力传导变化;同时,我们对β-catenin探针和N-cadherin探针实施了点突变或结构域截短处理,得到β-catenin（Y489 mutant）和N-cadherin（△β-catenin）张力探针,用来揭示细胞内张力来源及其传递;并采用细胞骨架稳定剂和过表达点突变探针和结构域截短探针研究了细胞结构张力与细胞侵袭转移能力的关系;通过转染lifeact和免疫荧光实验观察:微丝骨架解聚变化对上述张力传递的影响;采用冰点渗透压仪量化细胞质渗透压的变化;结合钙离子检测实验、MQAE实验和纳米颗粒数量分析仪评估:细胞内液钙、氯离子浓度和蛋白颗粒数目及分布变化。结果:EGF刺激增强了 A549... 

【文章来源】：南京中医药大学江苏省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?：?Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｐｃａｔｅｎｉｎ张力探针的构建及有效性、运动性检狈Ｉ］??Ａ张力传感器简要机制示意图

?南京中医药大学硕士学位论文???Ａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ?Ｂ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ??？?＿霉ｇ讓??＿＿?、私魏??Ｃ?？?ｉ〇〇１?＾－１?Ｄ?一?■（：〇＿??ｄ?＿?ＥＧＦ??｜?８〇＿?Ｉ?１５°－??ｌ?６０－?＇Ｓ??Ｓ?ｓ?１０°－??Ｉ?４０—?１?＿?■??ｒ：ｌ＾＿?：：谩丄??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ?Ｉｎｖａｓｉｏｎ?Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ??Ｐ－ａｃｔｉｎ??ｃ〇ｎｕ〇１?＂?ｉ；；??ｅｇｆ?＾?＾?ｍｍ?Ａ１?＼?：：７＾?．?？二??ｍｉｎ??ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ??Ｐ－ｃａｔａｎｉｎ??—?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?＂?一＿＊＾￣？?一??ｅｇｆ?ｈ?一，＿．—＾??ｎ＊＃ｎ??Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ??—１?丨：＾：??１，ａ＾－—???ＥＧＦ?ｉ。厂，：：??ｎｉｎ??图２：?ＥＧＦ诱导Ａ５４９细胞侵袭转移能力及Ｐ－ａｃｔｉｎ、Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ分子张力均增强??Ａ?Ａ５４９细胞的划痕实验。左边为对照组的〇丨１及２４ｈ后的划痕恢复情况，石边为ＥＧＦ诱导的Ａ５４９细??胞在Ｏｈ和２４ｈ的划痕情况。比例尺为３００｜ｉｍ。??Ｂ?Ａ５４９细胞的ｔｒａｎｓｗｅｌｌ携彳（实验。左边为对照组在２４ｈ后分别在铺基质胶与未铺基质胶时透过８｜ａｍ??聚碳酸酯微孔的细胞数Ｓ，右边为ＥＧＦ作用组／Ｅ?２４ｈ后分别在铺基质胶与未铺基质胶时透过ｈｉｍ聚碳??１９??

?南京中医药大学硕士学位论文???ＤＡＰＩ?Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ?Ｍｅｒｇｅ??Ｃｏｎｔｒｏｌ??—丨?Ｐｗ＾??——ｉｌ?￣?＿?一?—?，?－一?一．?？？?ｒ－＇－。，＇ｊ?ｃ?１?ｊ?＞?＜??■葡??Ｂ?Ｃｏｎｔｒｏｌ??ＥＧＦ??＾?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＥＧＦ?ＥＧＦ＋ＪＫ?ＥＧＦ＋Ｔａｘｏｌ?ＥＧＦ＋ＪＫ＋Ｔａｘｏｌ??＿＿＿＿＿??图５：?ＥＧＦ诱导Ａ５４９细胞Ｆ－ａｃｔｉｎ解聚增强，并向膜边缘移动??Ａ鬼笔环肽特异性染色Ｆ－ａｃｔｉｎ。蓝色表示细胞核，绿色表示Ｆ－ａｃｔｉｎ。右边为对应左图的荧光亮度折线??图，横坐标为左图ｍｅｒｇｅ中往箭头方向红线走向，纵坐标为荧光强度值。比例尺为２５剛。??Ｂ?Ａ５４９细胞转染ｌｉｆｅａｃｔ荧光染料２４ｈ后，ＥＧＦ及对照组作用细胞１５ｍｉｎ内Ｆ－ａｃｔｉｎ在细胞中分布情况。??比例尺力１５｜ａｍ。??Ｃ四组药物作用细胞１５ｍｍ及对照组的免疫荧光实验。蓝色为细胞核，绿色表示Ｆ－ａｃｔｉｎ，白色实心三??２９??


本文编号：2902411