妊娠期LPS暴露激活子代小胶质细胞诱导大鼠孤独症样行为
发布时间：2020-12-11 21:59
目的:探讨妊娠期LPS诱导的ASD样行为仔鼠的脑组织TLR4信号通路及小胶质细胞分型变化的关系。方法:24只孕鼠随机平分为LPS处理组及PBS对照组,分别于怀孕9.5天时给予腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS;每只100μg/kg）或等量PBS,所产子代大鼠即为LPS组及对照组仔鼠。三箱社交实验、旷场实验、嗅觉适应/去适应实验、水迷宫测试检测子代大鼠社交行为、探索行为、刻板行为及学习记忆能力。Western blotting技术检测仔鼠成年期前额皮质中紧密连接蛋白（Occludin和Claudin-5）、小胶质细胞相关蛋白（IBA-1、iNOS及Arg-1）以及TLR4信号通路相关蛋白（TLR4、Phospho-NFκB p65、IKKα）表达水平变化。Real-time PCR技术检测IBA-1、iNOS及Arg-1 mRNA表达水平变化。免疫荧光染色检测仔鼠前额皮质中小胶质细胞形态学改变。ELISA试剂盒测定孕鼠血清LBP、TNFα及仔鼠脑组织TNFα、IL-10浓度。体外培养N9小胶质细胞系,予以TLR4抑制剂TAK242处理后,观察LPS诱导的N9细胞...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体内动物实验流程图
重庆医科大学硕士研究生学位论文204）加入5%BSA溶液室温封闭1h。5）加入按比例配置好的一抗溶液4℃孵育过夜。6）回收一抗，PBS漂洗3次后加入对应的荧光二抗，室温避光孵育1h。7）PBS室温避光漂洗3次后加入DAPI染色20min。8）PBS清洗3次后于暗室小心取出盖玻片，倒扣于滴加了抗荧光淬灭剂的载玻片上，Nikon荧光显微镜观察。1.3统计学分析利用GraphPadPrism5.统计软件进行统计分析。计量资料采用均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，水迷宫潜伏期结果采用重复测量数据的方差分析。检验水准α=0.05。2.结果2.1母鼠血清LBP及TNFα水平变化LBP是脂多糖结合蛋白，可介导LPS与CD14结合，激活TLR4信号通路，诱导机体产生炎症反应，释放TNFα、IL-6等炎症因子。如图2A所示，妊娠期予以LPS腹腔注射的母鼠血清LBP浓度较PBS组显著升高（P0.01），同时伴有炎症因子TNFα分泌增加，其差异具有统计学意义（P0.05，图2B），表明妊娠期LPS处理可诱导母鼠免疫激活。图2LPS处理24h后孕鼠血清中LBP及TNFα分泌水平变化。Fig.2ThelevelsofserumLBPandTNFαinthepregnantratsfollowingLPSchallengefor24h.A.不同处理组孕鼠血清LBP浓度。B.不同处理组孕鼠血清TNFα浓度。A:TheconcentrationsofserumLBPinthepregnancyratsbetweenthePBSandLPSgroups.B:TheconcentrationsofserumTNFαinthepregnancyratsbetweenthePBSandLPSgroups.(n=6,*P<0.05,**P<0.01)
重庆医科大学硕士研究生学位论文22图3妊娠中期LPS处理后仔鼠成年期孤独症样相关行为测试。Fig.3Theautism-likebehaviortestsoftheoffspringratstreatedbyLPSchallengeduringgestationalmiddle-period.A.仔鼠在陌生鼠箱及玩具箱中所花时间。B.仔鼠嗅不同棉签的总时间。C.旷场实验中仔鼠跨线次数。D.旷场实验中仔鼠自梳理毛发时间。A:Three-chambersociabilitytest:Thespending-timeoftheoffspringratsintheboxesofstrangeratandnovelobject.B:Thecumulativetimeoftheoffspringratstosniffedcottonswabs.C:Open-fieldtest:Comparisonofthenumbersofcrossgridamongtheoffspringratsintwogroups.D:Spendingtimeofoffspringrats’selfgrooming.(n=28,**P<0.01,***P<0.001,ns:notsignificantinposthoctests)2.2.4水迷宫实验Morris水迷宫测试主要检测实验动物对空间位置及定位的学习记忆能力。如图4A所示，检测第一天LPS组仔鼠的运动距离与PBS组相比无显著差异，表明妊娠期腹腔注射对仔鼠的运动能力没有影响。第2-5天定位航行实验结果显示，随着训练天数增加，两组仔鼠找到平台所用时间均逐渐缩短（图4B），但自第3天开始，LPS组仔鼠的潜伏时间仍较PBS组显著延迟，经重复测量资料方差分析发现两组间差异具有统计学意义（P0.001）。在第六天平台探索测试中，LPS组仔鼠穿越原平台所在位置的次数较PBS组有减少趋势，但两组间无统计学差异（图4C）。提示妊娠期的LPS处理可能会降低仔鼠生后空间学习记忆功能。
【参考文献】：
期刊论文
[1]TAK-242对脂多糖诱导的脓毒症脑病小鼠学习记忆功能障碍的改善作用[J]. 庹鹏,陈伟明,刘先保,吴亚芬,黄梦婷,陈晓彤,王寿平. 中国病理生理杂志. 2019(04)
[2]脂多糖诱导孤独症样大鼠的肠道通透性及肠道黏膜免疫系统的变化[J]. 陈保林,何慕兰,雷雨溪,杨亭,李廷玉,陈洁. 免疫学杂志. 2019(01)
本文编号：2911292
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
体内动物实验流程图
重庆医科大学硕士研究生学位论文204）加入5%BSA溶液室温封闭1h。5）加入按比例配置好的一抗溶液4℃孵育过夜。6）回收一抗，PBS漂洗3次后加入对应的荧光二抗，室温避光孵育1h。7）PBS室温避光漂洗3次后加入DAPI染色20min。8）PBS清洗3次后于暗室小心取出盖玻片，倒扣于滴加了抗荧光淬灭剂的载玻片上，Nikon荧光显微镜观察。1.3统计学分析利用GraphPadPrism5.统计软件进行统计分析。计量资料采用均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，水迷宫潜伏期结果采用重复测量数据的方差分析。检验水准α=0.05。2.结果2.1母鼠血清LBP及TNFα水平变化LBP是脂多糖结合蛋白，可介导LPS与CD14结合，激活TLR4信号通路，诱导机体产生炎症反应，释放TNFα、IL-6等炎症因子。如图2A所示，妊娠期予以LPS腹腔注射的母鼠血清LBP浓度较PBS组显著升高（P0.01），同时伴有炎症因子TNFα分泌增加，其差异具有统计学意义（P0.05，图2B），表明妊娠期LPS处理可诱导母鼠免疫激活。图2LPS处理24h后孕鼠血清中LBP及TNFα分泌水平变化。Fig.2ThelevelsofserumLBPandTNFαinthepregnantratsfollowingLPSchallengefor24h.A.不同处理组孕鼠血清LBP浓度。B.不同处理组孕鼠血清TNFα浓度。A:TheconcentrationsofserumLBPinthepregnancyratsbetweenthePBSandLPSgroups.B:TheconcentrationsofserumTNFαinthepregnancyratsbetweenthePBSandLPSgroups.(n=6,*P<0.05,**P<0.01)
重庆医科大学硕士研究生学位论文22图3妊娠中期LPS处理后仔鼠成年期孤独症样相关行为测试。Fig.3Theautism-likebehaviortestsoftheoffspringratstreatedbyLPSchallengeduringgestationalmiddle-period.A.仔鼠在陌生鼠箱及玩具箱中所花时间。B.仔鼠嗅不同棉签的总时间。C.旷场实验中仔鼠跨线次数。D.旷场实验中仔鼠自梳理毛发时间。A:Three-chambersociabilitytest:Thespending-timeoftheoffspringratsintheboxesofstrangeratandnovelobject.B:Thecumulativetimeoftheoffspringratstosniffedcottonswabs.C:Open-fieldtest:Comparisonofthenumbersofcrossgridamongtheoffspringratsintwogroups.D:Spendingtimeofoffspringrats’selfgrooming.(n=28,**P<0.01,***P<0.001,ns:notsignificantinposthoctests)2.2.4水迷宫实验Morris水迷宫测试主要检测实验动物对空间位置及定位的学习记忆能力。如图4A所示，检测第一天LPS组仔鼠的运动距离与PBS组相比无显著差异，表明妊娠期腹腔注射对仔鼠的运动能力没有影响。第2-5天定位航行实验结果显示，随着训练天数增加，两组仔鼠找到平台所用时间均逐渐缩短（图4B），但自第3天开始，LPS组仔鼠的潜伏时间仍较PBS组显著延迟，经重复测量资料方差分析发现两组间差异具有统计学意义（P0.001）。在第六天平台探索测试中，LPS组仔鼠穿越原平台所在位置的次数较PBS组有减少趋势，但两组间无统计学差异（图4C）。提示妊娠期的LPS处理可能会降低仔鼠生后空间学习记忆功能。
【参考文献】：
期刊论文
[1]TAK-242对脂多糖诱导的脓毒症脑病小鼠学习记忆功能障碍的改善作用[J]. 庹鹏,陈伟明,刘先保,吴亚芬,黄梦婷,陈晓彤,王寿平. 中国病理生理杂志. 2019(04)
[2]脂多糖诱导孤独症样大鼠的肠道通透性及肠道黏膜免疫系统的变化[J]. 陈保林,何慕兰,雷雨溪,杨亭,李廷玉,陈洁. 免疫学杂志. 2019(01)
本文编号：2911292
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/2911292.html
最近更新
教材专著
