关于朊蛋白通过激活NF-κB影响炎症反应的研究
发布时间：2020-12-18 23:56
既往研究表明细胞朊蛋白（Prion Protein,PrP）可能参与肿瘤的形成、转移和化学耐药性同时,PrP在调节炎症反应中也可能起重要作用。本课题通过硫酸葡聚糖钠盐（Dextran Sulfate Sodium,DSS）诱导结肠炎相关的结肠癌模型,研究了在野生型小鼠（WT）、朊蛋白敲除型小鼠(PrP-/-)以及朊蛋白过表达型小鼠（Tga20）三种基因型小鼠中,PrP对肿瘤发生和炎症的影响,并探索了PrP在NF-κB激活过程中的作用。本课题首先采用口服1.5%DSS诱导结肠炎相关的结肠癌模型,比较了三种基因型小鼠的体重变化百分比和肿瘤数目。通过HE染色比较三种基因型小鼠的组织活性指数（Histological Activity Index,HAI）及应用实时定量逆转录PCR（Reverse Transcription quantitative PCR,RT-qPCR）比较三种基因型小鼠结肠组织中炎症因子的表达。用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）处理三种基因型小鼠骨髓源性巨噬细胞（Bone marrow-derived macrophages,...
【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1：NF-κB蛋白家族成员图[64]
华东师范大学2020级硕士学位论文8图1.3.2：激活NF-κB的经典和非经典途经[64]1.3.3NF-κB在炎症中的作用NF-κB控制着数百个重要的生物学基因的表达，其亚基在调节细胞功能，细胞死亡和存活以及增殖中都具有重要作用。并且在控制免疫应答的基因中，NF-κB具有非常重要的生理意义。在绝大多数细胞中，NF-κB的亚基p65包含主要的NF-κB转录活性，也是唯一的一个缺失会导致胚胎致死率的NF-κB的亚基，它负责大量促炎性介质的表达，这些介质通过先天免疫细胞，T细胞和B细胞来促进白细胞募集[68,69]。同时，p65在继发性淋巴器官发育中也具有重要作用。RelB的主要形式是p50和p52的异源二聚体[64]，RelB缺乏小鼠表现出严重的炎性表型，包括在多个器官中的T细胞浸润、炎性皮炎、依赖T细胞的骨髓增生和脾肿大[70]。此外，RelB缺乏小鼠还表现出继发性淋巴器官的发育受阻现象[71]。RelB对于边缘区的正常发育及其通过巨噬细胞和B细胞的浸润是必不可少的[72]。已有研究表明了c-Rel
华东师范大学2020级硕士学位论文18变性：94℃2min；扩增：94℃30s；62℃30s；30×循环退火延伸：72℃1min；72℃10min；4.PCR反应程序完成之后在20μl体系中加4μl6×DNALoadingBuffer，混合均匀后取10μl到1%琼脂糖凝胶中，140V，35min电泳后用ChemiDox呈像仪在紫外通道下拍照分析；3.1.21.5%DSS结直肠癌模型给药方案及组织处理（一）八周1.5%DSS结直肠癌模型给药方案1.选取WT，PrP-/-，Tga20三种基因型八周龄以上雄鼠，只数分别为8、8、10，并将其称重；2.将DSS溶解于水中配制1.5%DSS；3.建立八周的1.5%DSS结直肠癌模型如下图（图3.1.2.1）：第0周将小鼠的正常饮水换成含1.5%DSS的饮用水，之后正常饮水两周，第三周将小鼠的正常饮水换成含1.5%DSS的饮用水，之后正常饮水两周，第六周将小鼠的正常饮水换成含1.5%DSS的饮用水，第七周正常饮水，第八周处死采集样本（下图给药方案黑色框为给药时间，白色框为正常饮水时间，白色箭头为处死时间点）；图3.1.2.1：八周1.5%DSS结直肠癌模型给药图
本文编号：2924842
【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1：NF-κB蛋白家族成员图[64]
华东师范大学2020级硕士学位论文8图1.3.2：激活NF-κB的经典和非经典途经[64]1.3.3NF-κB在炎症中的作用NF-κB控制着数百个重要的生物学基因的表达，其亚基在调节细胞功能，细胞死亡和存活以及增殖中都具有重要作用。并且在控制免疫应答的基因中，NF-κB具有非常重要的生理意义。在绝大多数细胞中，NF-κB的亚基p65包含主要的NF-κB转录活性，也是唯一的一个缺失会导致胚胎致死率的NF-κB的亚基，它负责大量促炎性介质的表达，这些介质通过先天免疫细胞，T细胞和B细胞来促进白细胞募集[68,69]。同时，p65在继发性淋巴器官发育中也具有重要作用。RelB的主要形式是p50和p52的异源二聚体[64]，RelB缺乏小鼠表现出严重的炎性表型，包括在多个器官中的T细胞浸润、炎性皮炎、依赖T细胞的骨髓增生和脾肿大[70]。此外，RelB缺乏小鼠还表现出继发性淋巴器官的发育受阻现象[71]。RelB对于边缘区的正常发育及其通过巨噬细胞和B细胞的浸润是必不可少的[72]。已有研究表明了c-Rel
华东师范大学2020级硕士学位论文18变性：94℃2min；扩增：94℃30s；62℃30s；30×循环退火延伸：72℃1min；72℃10min；4.PCR反应程序完成之后在20μl体系中加4μl6×DNALoadingBuffer，混合均匀后取10μl到1%琼脂糖凝胶中，140V，35min电泳后用ChemiDox呈像仪在紫外通道下拍照分析；3.1.21.5%DSS结直肠癌模型给药方案及组织处理（一）八周1.5%DSS结直肠癌模型给药方案1.选取WT，PrP-/-，Tga20三种基因型八周龄以上雄鼠，只数分别为8、8、10，并将其称重；2.将DSS溶解于水中配制1.5%DSS；3.建立八周的1.5%DSS结直肠癌模型如下图（图3.1.2.1）：第0周将小鼠的正常饮水换成含1.5%DSS的饮用水，之后正常饮水两周，第三周将小鼠的正常饮水换成含1.5%DSS的饮用水，之后正常饮水两周，第六周将小鼠的正常饮水换成含1.5%DSS的饮用水，第七周正常饮水，第八周处死采集样本（下图给药方案黑色框为给药时间，白色框为正常饮水时间，白色箭头为处死时间点）；图3.1.2.1：八周1.5%DSS结直肠癌模型给药图
本文编号：2924842
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