栀子苷抑制巨噬源性泡沫细胞形成的机制研究
发布时间：2020-12-20 00:31
动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种由胆固醇含量非常丰富的巨噬细胞在动脉壁异常积聚所致脂质代谢不均衡和适应性免疫反应的复杂慢性炎症性疾病。主动脉内膜下巨噬细胞逐步泡沫化不仅是动脉粥样硬化的关键因素之一,也是其发病的早期标志。抑制泡沫化进程可以防治AS发展的观点已得到学界广泛共识。栀子苷（Geniposide,Gen）是茜草科植物栀子的成熟果实中提取的主要药用成分之一,已知栀子苷具有抗AS的作用,但是其机制尚不清楚。本文主要研究了栀子苷能否通过抑制泡沫细胞的形成而发挥其动脉粥样硬化的防治作用,并阐明其可能分子机制。我们使用LPA处理Raw264.7细胞使其泡沫化,建立了稳定的泡沫细胞模型。通过指定浓度剂量的栀子苷处理Raw264.7细胞后,CCK-8法检测细胞活力。通过细胞总胆固醇检测试剂盒和油红O染色比较栀子苷处理前后对巨噬源性泡沫细胞的形成的抑制情况。通过WB和RT-PCR等技术检测脂质转运相关蛋白及mRNA表达水平,并进一步探讨其可能机制。此外,以高脂饲料饲养ApoE-/-小鼠16周,而构建了动物AS模型。在后四周以不同剂量的栀子苷治疗A...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPA诱导Raw264.7泡沫细胞的形成
重庆医科大学硕士研究生学位论文21图2.栀子苷浓度梯度对Raw264.7巨噬细胞存活率的影响。Fig.2.EffectsofgeniposideconcentrationgradientonsurvivalrateofRaw264.7macrophages.注：NS表示没有统计学差异（p>0.05）。2.3栀子苷剂量依赖性地抑制巨噬源性泡沫细胞的形成。动脉血管内膜中巨噬源性泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化病变早期的主要标志[9]。为了研究子苷对泡沫细胞形成的潜在影响，将Raw264.7巨噬细胞用LPA处理及不同浓度的栀子苷（50、100、200μg/ml）处理24h。然后对Raw264.7细胞进行油红O染色和总胆固醇酯/胆固醇定量测定。如图3A和3B所示，与对照组相比，栀子苷治疗组Raw264.7细胞内脂质滴的数量呈现剂量依赖性地显著减少。如图3C所示，通过细胞内胆固醇酯测定实验表明，用栀子苷处理后，与对照组相比细胞内胆固醇酯明显减少。总之，这些结果表明，栀子苷剂量依赖性地有效抑制Raw264.7巨噬源性泡沫细胞的形成。在后续的实验中我们将进一步探究栀子苷抑制巨噬源性泡沫细胞形成的可能机制。
重庆医科大学硕士研究生学位论文22图3.栀子苷以剂量依赖性方式抑制泡沫细胞的形成。（A）通过油红O染色观察栀子苷处理对细胞内脂滴的影响。（B）油红O染色的定量分析。（C）栀子苷处理对细胞内胆固醇酯的量的影响。(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)Fig.3.Geniposideinhibitstheformationoffoamcellsinadose-dependentmanner.Raw264.7macrophageswasexposedto200mMLPAfor24hinthepresenceorabsenceofdifferentconcentrationsof50,100or200μg/mlgeniposide.(A)Raw264.7cellswerestainedwithOilRedO.(B)QuantificationofoilredOstaining.(C)Thecholesterol/cholesterolesterassaywasmeasured.(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)2.4栀子苷对Raw264.7巨噬细胞内脂质转运相关蛋白表达的影响。考虑到栀子苷能够有效的抑制泡沫细胞的形成，我们进一步研究了栀子苷对于胆固醇转运相关蛋白ABCG1、ABCA1和清道夫受体SR-A、CD36及SR-B1的mRNA和蛋白质表达的影响。如图4A和4B所示，与仅用LPA诱导的Raw264.7巨噬细胞泡沫化模型组相比，栀子苷治疗组中SR-A的mRNA水平明显下调，ABCA1和SR-B1的mRNA水平上调。而ABCG1/CD36的mRNA水平均无明显
本文编号：2926854
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPA诱导Raw264.7泡沫细胞的形成
重庆医科大学硕士研究生学位论文21图2.栀子苷浓度梯度对Raw264.7巨噬细胞存活率的影响。Fig.2.EffectsofgeniposideconcentrationgradientonsurvivalrateofRaw264.7macrophages.注：NS表示没有统计学差异（p>0.05）。2.3栀子苷剂量依赖性地抑制巨噬源性泡沫细胞的形成。动脉血管内膜中巨噬源性泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化病变早期的主要标志[9]。为了研究子苷对泡沫细胞形成的潜在影响，将Raw264.7巨噬细胞用LPA处理及不同浓度的栀子苷（50、100、200μg/ml）处理24h。然后对Raw264.7细胞进行油红O染色和总胆固醇酯/胆固醇定量测定。如图3A和3B所示，与对照组相比，栀子苷治疗组Raw264.7细胞内脂质滴的数量呈现剂量依赖性地显著减少。如图3C所示，通过细胞内胆固醇酯测定实验表明，用栀子苷处理后，与对照组相比细胞内胆固醇酯明显减少。总之，这些结果表明，栀子苷剂量依赖性地有效抑制Raw264.7巨噬源性泡沫细胞的形成。在后续的实验中我们将进一步探究栀子苷抑制巨噬源性泡沫细胞形成的可能机制。
重庆医科大学硕士研究生学位论文22图3.栀子苷以剂量依赖性方式抑制泡沫细胞的形成。（A）通过油红O染色观察栀子苷处理对细胞内脂滴的影响。（B）油红O染色的定量分析。（C）栀子苷处理对细胞内胆固醇酯的量的影响。(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)Fig.3.Geniposideinhibitstheformationoffoamcellsinadose-dependentmanner.Raw264.7macrophageswasexposedto200mMLPAfor24hinthepresenceorabsenceofdifferentconcentrationsof50,100or200μg/mlgeniposide.(A)Raw264.7cellswerestainedwithOilRedO.(B)QuantificationofoilredOstaining.(C)Thecholesterol/cholesterolesterassaywasmeasured.(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)2.4栀子苷对Raw264.7巨噬细胞内脂质转运相关蛋白表达的影响。考虑到栀子苷能够有效的抑制泡沫细胞的形成，我们进一步研究了栀子苷对于胆固醇转运相关蛋白ABCG1、ABCA1和清道夫受体SR-A、CD36及SR-B1的mRNA和蛋白质表达的影响。如图4A和4B所示，与仅用LPA诱导的Raw264.7巨噬细胞泡沫化模型组相比，栀子苷治疗组中SR-A的mRNA水平明显下调，ABCA1和SR-B1的mRNA水平上调。而ABCG1/CD36的mRNA水平均无明显
本文编号：2926854
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