应用酶热传感器进行抗生素耐药性检测研究

发布时间：2020-12-21 21:32

　　抗生素耐药日益严重的威胁着人类的健康。在临床治疗中由于缺少快速、准确的病原菌抗生素耐药性诊断数据而导致错误及过度使用抗生素,其是产生抗生素耐药性的一个重要原因。产β-内酰胺酶是导致革兰氏阴性菌产生抗生素耐药性的一个最主要的机制。在千余种β-内酰胺酶中,由于超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和碳青霉烯酶对具有广谱抗菌作用的3代、4代头孢菌素及碳青霉烯类抗生素具有耐药作用,因此在抗感染治疗中被列为重点监测、检测目标。目前ESBLs NDP、Carba NP及表型鉴定法是检测产ESBLs和碳青霉烯酶耐药菌的主要方法,但是这些方法在检测灵敏性和检测时间上都还有不足。固相有青霉素酶的酶热传感器（青霉素酶酶热传感器）可对奶液中非法外源添加青霉素酶进行有效检测,但该传感器由于本质上对头孢菌素类及碳青霉烯类抗生素无法有效水解而不能应用于产ESBLs和碳青霉烯酶耐药菌的检测。本研究利用对头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素均具有广谱水解活性的新德里金属β-内酰胺酶-1（NDM-1）建立NDM-1酶热传感器,评价该传感器联合β-内酰胺酶抑制剂在检测ESBLs、碳青霉烯酶及产ESBLs和碳青霉烯酶耐药菌的敏感性和有效... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

应用NDM-1酶热传感器快速检测产ESBLs和碳青霉烯酶耐药菌原理图

应用酶热传感器进行抗生素耐药性检测研究10生素溶液，然后将不同抗生素上样到NDM-1酶热传感器（上样时上样缓冲液与配置抗生素的缓冲液一致）并记录反应产生的电信号数据。每隔5天检测一次，连续检测40天。2.3.5NDM-1酶热传感器最适pH的测定分别配制pH8.0、pH7.5、pH7.0、pH6.5、pH6.0含有10uMZn2+的1×PBS上样缓冲液。用不同pH的缓冲液分别配制终体积为500uL、浓度为200mg/L的青霉素（PenicillinG）、哌拉西林（Piperacillin）、头孢曲松（Ceftriaxone）、头孢唑啉（Cefazolin）、头孢吡肟（Cefepime）、美罗培南（Meropenem）。然后在不同pH的上样缓冲液条件下测定六种抗生素通过NDM-1酶热传感器产生的电信号（上样时上样缓冲液与配置抗生素的缓冲液一致），并记录反应数据。每个反应做3次重复。2.3.6统计学分析使用GraphPadPrism5进行统计分析，P值<0.05被认定为两组间差异显著。P<0.05、P<0.01、P<0.001分别用*、**、***进行表示。2.4实验结果2.4.1NDM-1酶柱的制备结果成功的制备了固相有NDM-1酶的酶柱，并以该酶柱组装酶热传感器成为NDM-1酶热传感器。图2.1比较NDM-1酶热传感器Fig.2.1TheNDM-1thermalsensor

比较NDM-1酶热传感器与青霉素酶酶热传感器对六种不同抗生素的水解反应活性标准曲线


本文编号：2930541