人肥大细胞来源外泌体中miR-223对肠道屏障功能影响的研究
发布时间：2020-12-22 06:15
研究背景炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease,IBD）是一种病因未明的肠道慢性非特异性炎症性疾病,近年来其发病率逐渐升高,IBD不仅严重影响了患者的生活质量,而且加重了家庭及社会的经济负担。为了寻找新的药物靶点以及更好的治疗方法,仍需要进一步深入研究IBD的发病机制。近年来,肥大细胞在IBD发生发展中的作用越来越被重视,主要表现为肥大细胞可以促进肠道炎症反应及破坏屏障功能。然而,肥大细胞在IBD中的具体致病机制尚未完全阐明。外泌体（Exosomes）作为细胞间物质传递及信号转导的重要载体,可由多种类型的细胞分泌,而不同细胞来源的外泌体具有不同的生物学功能。外泌体被受体细胞摄取后,外泌体所携带的mi RNA（Micro RNA）、lnc RNA（Long non-coding RNA）等可调控受体细胞的基因或蛋白表达。研究表明,外泌体在免疫调节中起重要作用,与系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的发病机制密切相关。多项研究发现,IBD患者血清中的外泌体mi RNA表达水平异常。肠道黏膜屏障作为机体抵抗外来有害物质的重要防线,对于预防IBD的发生及恢复...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
透射电镜观察下可见典型外泌体形态，
结果31图1B.Westernblotting检测蛋白样品中外泌体标记蛋白CD63、TSG101和阴性对照蛋白GM130、Histone、Calnexin的表达情况。2人肥大细胞来源外泌体可被肠上皮细胞摄取用荧光染料PKH67标记从人肥大细胞条件培养基中提取的外泌体，将所得外泌体与CaCO2、NCM460及HT29细胞共培养24h，再用DAPI对细胞核进行染色，观察三种肠上皮细胞中PKH67标记外泌体的荧光位置，结果显示三种肠上皮细胞内可观察到大量绿色荧光，成团聚集，主要位于细胞质内，表明人肥大细胞来源外泌体可被CaCO2、NCM460及HT29三种肠上皮细胞摄取（图2）。
广州医科大学硕士学位论文32图2.荧光显微镜下观察人肥大细胞外泌体被肠上皮细胞CaCO2、NCM460及HT29摄取情况，PKH67为绿色荧光，DAPI为蓝色荧光。3肠上皮细胞摄取人肥大细胞来源外泌体后细胞通透性增加为了研究人肥大细胞来源外泌体对肠上皮细胞通透性的影响，我们建立了CaCO2及NCM460两种肠上皮细胞屏障模型，对照组及实验组分别加入PBS溶液及含外泌体PBS溶液共培养72h，然后加入FITC-Dextran溶液孵育2h后通过酶标仪测定Transwell小室基底部液体OD值的大小来确定肠上皮细胞的通透性变化，结果发现，与PBS组对比，加入外泌体处理后的Transwell小室基底部液体OD值变大（图3）。CaCO2及NCM460两种肠上皮细胞屏障模型的趋势一致，由此表明肠上皮细胞摄取人肥大细胞外泌体后肠上皮细胞通透性增加。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Modulation of faecal metagenome in Crohn’s disease:Role of microRNAs as biomarkers[J]. María Rojas-Feria,Teresa Romero-García,Jose ángel Fernández Caballero-Rico,Helena Pastor Ramírez,Marta Avilés-Recio,Manuel Castro-Fernandez,Natalia Chueca Porcuna,Manuel Romero-G?mez,Federico García,Lourdes Grande,José A Del Campo. World Journal of Gastroenterology. 2018(46)
[2]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
[3]Multispecies probiotic protects gut barrier function in experimental models[J]. Mylene Nébot-Vivinus,Cherryl Harkat,Hanene Bzioueche,Christel Cartier,Raffaella Plichon-Dainese,Lara Moussa,Helene Eutamene,Dorsa Pishvaie,Sophie Holowacz,Christian Seyrig,Thierry Piche,Vassilia Theodorou. World Journal of Gastroenterology. 2014(22)
本文编号：2931286
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
透射电镜观察下可见典型外泌体形态，
结果31图1B.Westernblotting检测蛋白样品中外泌体标记蛋白CD63、TSG101和阴性对照蛋白GM130、Histone、Calnexin的表达情况。2人肥大细胞来源外泌体可被肠上皮细胞摄取用荧光染料PKH67标记从人肥大细胞条件培养基中提取的外泌体，将所得外泌体与CaCO2、NCM460及HT29细胞共培养24h，再用DAPI对细胞核进行染色，观察三种肠上皮细胞中PKH67标记外泌体的荧光位置，结果显示三种肠上皮细胞内可观察到大量绿色荧光，成团聚集，主要位于细胞质内，表明人肥大细胞来源外泌体可被CaCO2、NCM460及HT29三种肠上皮细胞摄取（图2）。
广州医科大学硕士学位论文32图2.荧光显微镜下观察人肥大细胞外泌体被肠上皮细胞CaCO2、NCM460及HT29摄取情况，PKH67为绿色荧光，DAPI为蓝色荧光。3肠上皮细胞摄取人肥大细胞来源外泌体后细胞通透性增加为了研究人肥大细胞来源外泌体对肠上皮细胞通透性的影响，我们建立了CaCO2及NCM460两种肠上皮细胞屏障模型，对照组及实验组分别加入PBS溶液及含外泌体PBS溶液共培养72h，然后加入FITC-Dextran溶液孵育2h后通过酶标仪测定Transwell小室基底部液体OD值的大小来确定肠上皮细胞的通透性变化，结果发现，与PBS组对比，加入外泌体处理后的Transwell小室基底部液体OD值变大（图3）。CaCO2及NCM460两种肠上皮细胞屏障模型的趋势一致，由此表明肠上皮细胞摄取人肥大细胞外泌体后肠上皮细胞通透性增加。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Modulation of faecal metagenome in Crohn’s disease:Role of microRNAs as biomarkers[J]. María Rojas-Feria,Teresa Romero-García,Jose ángel Fernández Caballero-Rico,Helena Pastor Ramírez,Marta Avilés-Recio,Manuel Castro-Fernandez,Natalia Chueca Porcuna,Manuel Romero-G?mez,Federico García,Lourdes Grande,José A Del Campo. World Journal of Gastroenterology. 2018(46)
[2]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
[3]Multispecies probiotic protects gut barrier function in experimental models[J]. Mylene Nébot-Vivinus,Cherryl Harkat,Hanene Bzioueche,Christel Cartier,Raffaella Plichon-Dainese,Lara Moussa,Helene Eutamene,Dorsa Pishvaie,Sophie Holowacz,Christian Seyrig,Thierry Piche,Vassilia Theodorou. World Journal of Gastroenterology. 2014(22)
本文编号：2931286
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/2931286.html
最近更新
教材专著
