碱性成纤维细胞因子对根尖牙乳头干细胞成骨分化影响的RNA-Seq研究
发布时间：2020-12-22 18:52
目的:课题组前期研究发现碱性成纤维细胞因子（Basic fibroblast growth factor,b FGF）可调控根尖牙乳头干细胞（Stem cells from the apical papilla,SCAP）成骨/成牙本质分化,维持SCAP分化潜能,Wnt/β-catenin信号通路和p38信号通路参与了该过程并存在相互串扰。本实验在前期研究基础上,通过转录组测序进一步分析b FGF在调控SCAP成骨分化中的分子机制,为SCAP的进一步研究和临床应用提供理论实验基础。方法:1、采用酶消化法获得人原代SCAP,通过有限稀释法、克隆化传代培养SCAP,免疫荧光染色检测间充质干细胞标志物,并通过成骨成脂分化诱导进行多向分化能力鉴定。2、将第三代SCAP细胞分为两组:实验组（20ng/m L b FGF+成骨诱导液）,对照组（成骨诱导液）,分别诱导7天和14天,每组3个生物学重复,收集各样本的总RNA。RNA质检、构建c DNA文库、Hi Seq测序,构建SCAP的转录组数据库。质检数据库、比对基因组、基因表达水平和差异表达分析,筛选差异表达基因。以差异表达基因为对象,进一步进行...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转录组文库构建的程序图
遵义医科大学硕士学位论文孙丽英16分开来，其中能定位到基因组上的reads数量总样本量(Totalmapped)应大于60-70%。此部分由杭州联川生物公司提供技术支持。数据达到质控的要求，将被用于之后一系列数据的分析（图2）：图1转录组文库构建的程序图Fig.1Theprocedurediagramfortranscriptomelibraryconstruction图2转录组数据分析流程图Fig.2WorkflowsforRNA-seqdataanalysis
遵义医科大学硕士学位论文孙丽英201.4统计学方法数据录入SPSS23.0统计软件进行分析处理，数据均以均数±标准差（X±s）来表示，组间比较采用单因素方差分析，方差齐采用Least-SignificantDifference(LSD)检验进行分析，方差不齐采用Dunnett`sT3法进行分析，以ɑ=0.05为检验水准，P<0.05认为差异具有统计学意义。2.结果2.1SCAP的获取与来源鉴定牙根未发育完成的离体健康的根尖牙乳头组织呈粉色，位于根尖未发育完成的根尖部，为质地韧的纤维结缔组织，易剥离；有些牙根发育不足1/2时，其根尖乳头组织多而韧（图3A,B）。本实验采用I型胶原酶解组织块法提取原代根尖牙乳头细胞，3天左右在显微镜下观察到单个贴壁细胞，细胞体丰满，体积较小，核位于中央，呈成纤维细胞样细胞。有时见方形、椭圆形及多角形的细胞，细胞呈巢状或集落状生长（图3C,D）。图3根尖牙乳头干细胞的原代培养A,B.体外完整磨牙根尖牙乳头组织；C,D.SCAP原代细胞分别培养3天和7天呈巢状生长及生长汇合至90%(C×100；D×200)Fig.3PrimarycultureofstemcellsfromtheapicalpapillaA,BInvitrocompletemolarapicaltoothpapillatissue;C,DTheprimarycellsofSCAPshowednestgrowthat3daysand7daysrespectively,andthegrowthconfluencereached90%(C×100;D×200)原代SCAP细胞通过酶消化后记数于96孔板中，隔1天显微镜下观察单个贴壁
【参考文献】：
期刊论文
[1]牙髓干细胞干性维持的影响因素[J]. 左燕琴,于金华,闫明. 口腔生物医学. 2017(04)
[2]bFGF激活PI3K信号通路调控大鼠胚胎干细胞自我更新[J]. 林敏,李平,钱其军. 中国细胞生物学学报. 2016(05)
[3]间充质干细胞干性维持信号通路的研究进展[J]. 周颖,高孟飞,朱慧勇. 吉林大学学报(医学版). 2013(03)
[4]NFκB信号通路在炎症根尖牙乳头干细胞中的作用[J]. 杜鹃,杜娟,范志朋. 北京口腔医学. 2013(01)
博士论文
[1]碱性成纤维细胞因子对根尖牙乳头干细胞生物学作用及机制研究[D]. 吴家媛.第四军医大学 2011
硕士论文
[1]Wnt/β-catenin信号通路和p38信号通路对bFGF维持人根尖牙乳头干细胞干性的影响[D]. 何梅.遵义医科大学 2019
[2]体外研究DKK1在牙囊细胞的表达及在成骨分化的作用机制[D]. 颜露.新疆医科大学 2019
[3]骨膜素对子宫内膜间质细胞迁移、侵袭、粘附的调控及其机制研究[D]. 徐晓璇.山东大学 2015
本文编号：2932248
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转录组文库构建的程序图
遵义医科大学硕士学位论文孙丽英16分开来，其中能定位到基因组上的reads数量总样本量(Totalmapped)应大于60-70%。此部分由杭州联川生物公司提供技术支持。数据达到质控的要求，将被用于之后一系列数据的分析（图2）：图1转录组文库构建的程序图Fig.1Theprocedurediagramfortranscriptomelibraryconstruction图2转录组数据分析流程图Fig.2WorkflowsforRNA-seqdataanalysis
遵义医科大学硕士学位论文孙丽英201.4统计学方法数据录入SPSS23.0统计软件进行分析处理，数据均以均数±标准差（X±s）来表示，组间比较采用单因素方差分析，方差齐采用Least-SignificantDifference(LSD)检验进行分析，方差不齐采用Dunnett`sT3法进行分析，以ɑ=0.05为检验水准，P<0.05认为差异具有统计学意义。2.结果2.1SCAP的获取与来源鉴定牙根未发育完成的离体健康的根尖牙乳头组织呈粉色，位于根尖未发育完成的根尖部，为质地韧的纤维结缔组织，易剥离；有些牙根发育不足1/2时，其根尖乳头组织多而韧（图3A,B）。本实验采用I型胶原酶解组织块法提取原代根尖牙乳头细胞，3天左右在显微镜下观察到单个贴壁细胞，细胞体丰满，体积较小，核位于中央，呈成纤维细胞样细胞。有时见方形、椭圆形及多角形的细胞，细胞呈巢状或集落状生长（图3C,D）。图3根尖牙乳头干细胞的原代培养A,B.体外完整磨牙根尖牙乳头组织；C,D.SCAP原代细胞分别培养3天和7天呈巢状生长及生长汇合至90%(C×100；D×200)Fig.3PrimarycultureofstemcellsfromtheapicalpapillaA,BInvitrocompletemolarapicaltoothpapillatissue;C,DTheprimarycellsofSCAPshowednestgrowthat3daysand7daysrespectively,andthegrowthconfluencereached90%(C×100;D×200)原代SCAP细胞通过酶消化后记数于96孔板中，隔1天显微镜下观察单个贴壁
【参考文献】：
期刊论文
[1]牙髓干细胞干性维持的影响因素[J]. 左燕琴,于金华,闫明. 口腔生物医学. 2017(04)
[2]bFGF激活PI3K信号通路调控大鼠胚胎干细胞自我更新[J]. 林敏,李平,钱其军. 中国细胞生物学学报. 2016(05)
[3]间充质干细胞干性维持信号通路的研究进展[J]. 周颖,高孟飞,朱慧勇. 吉林大学学报(医学版). 2013(03)
[4]NFκB信号通路在炎症根尖牙乳头干细胞中的作用[J]. 杜鹃,杜娟,范志朋. 北京口腔医学. 2013(01)
博士论文
[1]碱性成纤维细胞因子对根尖牙乳头干细胞生物学作用及机制研究[D]. 吴家媛.第四军医大学 2011
硕士论文
[1]Wnt/β-catenin信号通路和p38信号通路对bFGF维持人根尖牙乳头干细胞干性的影响[D]. 何梅.遵义医科大学 2019
[2]体外研究DKK1在牙囊细胞的表达及在成骨分化的作用机制[D]. 颜露.新疆医科大学 2019
[3]骨膜素对子宫内膜间质细胞迁移、侵袭、粘附的调控及其机制研究[D]. 徐晓璇.山东大学 2015
本文编号：2932248
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/2932248.html
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