三叶苷延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用及其机制研究

发布时间：2021-01-03 05:20

　　目的:研究三叶苷（TLB）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用,并探究其可能的作用机制。方法:同期化的秀丽隐杆线虫株均在新鲜的NGM板上20°C培养2-3代后用于实验。在正常培养条件下观察不同浓度TLB（62.5、125、250μM）对秀丽隐杆线虫寿命的影响,并筛选出TLB的最佳延寿浓度。由于250μM TLB的延寿效果最佳,因此在后续实验中采用该浓度进行实验。将实验秀丽隐杆线虫随机分为对照组及250μM TLB组,通过检测秀丽隐杆线虫生殖力、移动力、脂褐质及咽泵速率等评价TLB对正常寿命相关生理指标的影响。在此基础上,将对照组和250μM TLB组秀丽隐杆线虫于20°C条件下培养72 h,然后在35°C条件下孵育2 h进行热应激实验,或将秀丽隐杆线虫转移到含百草枯的NGM板上,在20°C条件下孵育进行氧化应激实验。通过ELISA法检测秀丽隐杆线虫体内活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、SOD及其亚型（SOD1、SOD2和SOD3）、过氧化物酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的水平。采用荧光显微镜检测CF1139（DAF16::GFP）、CL2166（GST4:... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

在正常培养条件下（20°C），TLB延长了野生型秀丽隐杆线虫的寿命（A）TLB的结构示意图；（B）

遵义医科大学硕士学位论文李纳21图3TLB能增强秀丽隐杆线虫的应激耐受力（A）百草枯诱导下的Kaplan-Meier生存曲线；（B）35°C条件下Kaplan-Meier生存曲线；（C）蛋白质SOD3和HSP16.2的平均像素荧光强度，（标尺=100μm）；（D）量化蛋白质SOD3和HSP16.2，应用ImageProPlus软件量化蛋白SOD3和HSP16.2含量的变化情况。数据以三次独立实验的x±SEM表示，与对照组相比，*P<0.05。

遵义医科大学硕士学位论文李纳23图4TLB改变了衰老秀丽隐杆线虫的行为表现（A）繁殖实验，计数秀丽隐杆线虫每日和总的产卵量；（B）秀丽隐杆线虫身体移动实验；（C）秀丽隐杆线虫咽泵速率实验；（D）250μMTLB和对照组eat2（DA1116）II秀丽隐杆线虫的生存曲线；（E-F）应用ImageProPlus软件量化秀丽隐杆线虫体内自发荧光脂褐质的平均荧光强度，（标尺=100μm）。数据以三次独立实验的x±SEM表示，与对照组相比，*P<0.05。Figure4TLBchangedbehaviorsinagingC.elegans.(A)Progenyproductionassays.(B)Bodymovementassays.(C)PharyngealpumpingrateofC.elegansassays.(D)Thesurvivalcurvesofeat2(ad1116)IIC.elegansraisedon0μΜand250μMTLBat20°C.(E,F)LipofuscinautofluorescenceintensityweredetectedbyapplyingtheImageProPlussoftwarebyquantifyingthemeanpixelintensity.Magnification,100ⅹ;scalebar=100μm.Datawerepresentedasmean±SEM.*P


本文编号：2954394