毛蕊花糖苷通过ERK5信号通路影响肝癌细胞侵袭及迁移的实验研究
发布时间：2021-01-03 23:34
目的:探讨中草药化合物毛蕊花糖苷对肝癌细胞侵袭、迁移的影响及其分子机制。方法:将不同浓度（0μM,40μM,60μM,80μM,100μM,120μM）的毛蕊花糖苷加入人肝癌HepG2细胞,分别作用24小时、48小时和72小时,在倒置显微镜下观察毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞形态学的影响,CCK8法检测毛蕊花糖苷对肝癌细胞增殖的影响,并确定下一步的药物浓度和作用时间。细胞划痕实验检测毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞运动能力的影响,Transwell小室实验检测毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞侵袭及迁移的影响,Western Blot检测毛蕊花糖苷对ERK5、p-ERK5以及基质金属蛋白酶MMP-9、MMP-2表达的影响。结果:1.细胞形态学变化:随着毛蕊花糖苷浓度的递增,人肝癌HepG2细胞的数量明显减少,形态逐渐变圆,贴壁性变差,可看见增多的漂浮坏死细胞,细胞间的连接稀疏,边界模糊不清,还可看到一些形态不完整细胞。2.CCK-8结果:随着毛蕊花糖苷浓度的增加和时间的延长,人肝癌HepG2细胞的活性逐渐降低,增殖能力受到不同程度的抑制,并呈现一定的浓度、时间依耐性。IC50约为98μ...
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度和时间的毛蕊花糖苷对肝癌细胞的抑制率的影响，差异具有显著性,*p﹤0.05,**p﹤0.01
2. 毛蕊花糖苷影响人肝癌 HepG2 细胞的形态学变化将浓度为（0μM， 40μM，60μM，80μM，100μM，120μM）的毛蕊花糖苷，加入到人肝癌 HepG2 细胞 24 小时后，镜下可见 0μM 的细胞数量多，细胞形态呈梭形或者菱形，细胞与细胞间的连接紧密，并且贴壁良好，而随着药物浓度的增加，人肝癌 HepG2 细胞的数量明显减少，形态逐渐变圆，细胞体积明显缩小，贴壁性能逐渐变差，逐渐可看见增多的漂浮的坏死细胞，细胞之间的联系稀疏，边界模糊不清，并出现了一些形态不完整的细胞（图 2）。
毛蕊花糖苷通过ERK5信号通路影响肝癌细胞侵袭及迁移的实验研究27withtheblankcontrolgroup,*p﹤0.05,**p﹤0.01.#Comparedwiththepositivecontrolgroup#p﹤0.05,##p﹤0.01.CD图3-C毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞迁移能力的影响（×20倍）；图3-D各浓度组对人肝癌HepG2细胞的迁移细胞数目的影响，具有统计学差异,*表示与空白对照组比较，*P＜0.05，**p﹤0.01。#表示与阳性对照组比较，#p﹤0.05,##p﹤0.01。Fig.3-CEffectofVerbascosideonmigrationofHepG2cells(×20);Fig.3-DEffectofdifferentgrouponthenumberofmigrationsinhumanhepatocellularcarcinomaHepG2cells.*Comparedwiththeblankcontrolgroup,*p﹤0.05,**p﹤0.01.#Comparedwiththepositivecontrolgroup#p﹤0.05,##p﹤0.01.3.2毛蕊花糖苷抑制人肝癌HepG2细胞的侵袭能力观察细胞瓶中人肝癌HepG2细胞涨至80-90%时，设置空白对照组、实验组、阳性对照组，作用24小时，采用Transwell小室法检测毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞侵袭能力的影响。如图所示，与空白对照组相比，实验组穿过小室的细胞数目明显减少，穿膜的能力逐渐减弱（图3-E）。其中，空白对照组、实验组（80μM，100μM）和阳性对照组的细胞侵袭数目分别为419.80±19.1个、211.07±15.64
【参考文献】：
期刊论文
[1]肉苁蓉药材中6种苯乙醇苷类成分含量的一测多评法测定[J]. 马学琴,董彦红,郭琪,丁桦. 时珍国医国药. 2018(10)
[2]臭牡丹地上部分抗肿瘤活性的筛选[J]. 余娜,朱克俭,谢谊. 湖南中医杂志. 2017(11)
[3]甘肃马先蒿毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷制备工艺研究[J]. 曹馨元,冯霞,李茂星,陶锐,王先敏,毛婷. 中草药. 2016(10)
[4]苦参碱对人肝癌HepG2细胞的作用机制研究[J]. 杨婉,王盖昊,王兆林,武承凤,赵红珍,于晓辉. 中西医结合肝病杂志. 2016(02)
[5]地区差异对胃癌疾病特征的影响[J]. 弓艳霞,唐艳萍,郭丽,陈洮明,康丽丽,牛薇,王占风,陈盈,张婷. 世界华人消化杂志. 2016(07)
[6]川芎嗪抗肿瘤研究进展[J]. 杨栋,张培彤. 辽宁中医杂志. 2015(11)
[7]盐生肉苁蓉总苷对实验性肝损伤的保护作用[J]. 王艳芳,赵继军,海鹏丽,薛培凤,李辉,李旻辉. 天然产物研究与开发. 2015(06)
[8]产甲胎蛋白胃癌的临床病理及预后分析[J]. 甘涛,夏涛,李威,罗运生,陈远健,杨颢,张明明. 华中科技大学学报(医学版). 2012(04)
[9]苯丙素甙逆转大肠癌耐药与凋亡的关系[J]. 马强,张方信,吕志诚,陈嘉屿,康生朝. 世界华人消化杂志. 2009(23)
[10]Negundoside,an irridiod glycoside from leaves of Vitex negundo,protects human liver cells against calcium-mediated toxicity induced by carbon tetrachloride[J]. Sheikh A Tasduq,Peerzada J Kaiser,Bishan D Gupta,Vijay K Gupta,Rakesh K Johri. World Journal of Gastroenterology. 2008(23)
本文编号：2955699
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度和时间的毛蕊花糖苷对肝癌细胞的抑制率的影响，差异具有显著性,*p﹤0.05,**p﹤0.01
2. 毛蕊花糖苷影响人肝癌 HepG2 细胞的形态学变化将浓度为（0μM， 40μM，60μM，80μM，100μM，120μM）的毛蕊花糖苷，加入到人肝癌 HepG2 细胞 24 小时后，镜下可见 0μM 的细胞数量多，细胞形态呈梭形或者菱形，细胞与细胞间的连接紧密，并且贴壁良好，而随着药物浓度的增加，人肝癌 HepG2 细胞的数量明显减少，形态逐渐变圆，细胞体积明显缩小，贴壁性能逐渐变差，逐渐可看见增多的漂浮的坏死细胞，细胞之间的联系稀疏，边界模糊不清，并出现了一些形态不完整的细胞（图 2）。
毛蕊花糖苷通过ERK5信号通路影响肝癌细胞侵袭及迁移的实验研究27withtheblankcontrolgroup,*p﹤0.05,**p﹤0.01.#Comparedwiththepositivecontrolgroup#p﹤0.05,##p﹤0.01.CD图3-C毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞迁移能力的影响（×20倍）；图3-D各浓度组对人肝癌HepG2细胞的迁移细胞数目的影响，具有统计学差异,*表示与空白对照组比较，*P＜0.05，**p﹤0.01。#表示与阳性对照组比较，#p﹤0.05,##p﹤0.01。Fig.3-CEffectofVerbascosideonmigrationofHepG2cells(×20);Fig.3-DEffectofdifferentgrouponthenumberofmigrationsinhumanhepatocellularcarcinomaHepG2cells.*Comparedwiththeblankcontrolgroup,*p﹤0.05,**p﹤0.01.#Comparedwiththepositivecontrolgroup#p﹤0.05,##p﹤0.01.3.2毛蕊花糖苷抑制人肝癌HepG2细胞的侵袭能力观察细胞瓶中人肝癌HepG2细胞涨至80-90%时，设置空白对照组、实验组、阳性对照组，作用24小时，采用Transwell小室法检测毛蕊花糖苷对人肝癌HepG2细胞侵袭能力的影响。如图所示，与空白对照组相比，实验组穿过小室的细胞数目明显减少，穿膜的能力逐渐减弱（图3-E）。其中，空白对照组、实验组（80μM，100μM）和阳性对照组的细胞侵袭数目分别为419.80±19.1个、211.07±15.64
【参考文献】：
期刊论文
[1]肉苁蓉药材中6种苯乙醇苷类成分含量的一测多评法测定[J]. 马学琴,董彦红,郭琪,丁桦. 时珍国医国药. 2018(10)
[2]臭牡丹地上部分抗肿瘤活性的筛选[J]. 余娜,朱克俭,谢谊. 湖南中医杂志. 2017(11)
[3]甘肃马先蒿毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷制备工艺研究[J]. 曹馨元,冯霞,李茂星,陶锐,王先敏,毛婷. 中草药. 2016(10)
[4]苦参碱对人肝癌HepG2细胞的作用机制研究[J]. 杨婉,王盖昊,王兆林,武承凤,赵红珍,于晓辉. 中西医结合肝病杂志. 2016(02)
[5]地区差异对胃癌疾病特征的影响[J]. 弓艳霞,唐艳萍,郭丽,陈洮明,康丽丽,牛薇,王占风,陈盈,张婷. 世界华人消化杂志. 2016(07)
[6]川芎嗪抗肿瘤研究进展[J]. 杨栋,张培彤. 辽宁中医杂志. 2015(11)
[7]盐生肉苁蓉总苷对实验性肝损伤的保护作用[J]. 王艳芳,赵继军,海鹏丽,薛培凤,李辉,李旻辉. 天然产物研究与开发. 2015(06)
[8]产甲胎蛋白胃癌的临床病理及预后分析[J]. 甘涛,夏涛,李威,罗运生,陈远健,杨颢,张明明. 华中科技大学学报(医学版). 2012(04)
[9]苯丙素甙逆转大肠癌耐药与凋亡的关系[J]. 马强,张方信,吕志诚,陈嘉屿,康生朝. 世界华人消化杂志. 2009(23)
[10]Negundoside,an irridiod glycoside from leaves of Vitex negundo,protects human liver cells against calcium-mediated toxicity induced by carbon tetrachloride[J]. Sheikh A Tasduq,Peerzada J Kaiser,Bishan D Gupta,Vijay K Gupta,Rakesh K Johri. World Journal of Gastroenterology. 2008(23)
本文编号：2955699
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