FOXD3介导EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路调节结肠癌的发生发展

发布时间：2021-01-09 03:29

　　目的:通过小分子干扰RNA（SiRNA）和短发夹RNA（ShRNA）两种方法沉默FOXD3基因,研究该基因与结肠癌发生发展的关系及其作用机制。方法:（1）利用SiRNA沉默HCT116和Caco₂细胞中FOXD3基因的表达,通过Quantitative Real Time-PCR（qRT-PCR）和Western Blot的方法检测细胞中FOXD3在RNA水平和蛋白水平的表达情况;（2）通过SRB实验、克隆形成实验和Transwll实验,检测FOXD3基因沉默后,细胞的增殖能力和侵袭能力的变化;（3）利用流式细胞检测仪,分别用PI单染和Annexin V-FITC/PI双染的方法,对FOXD3基因沉默后细胞周期和凋亡的变化进行检测。（4）采用Western Blot的方法,检测FOXD3基因沉默后,细胞增殖相关的EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路蛋白、细胞迁移EMT过程相关的E-cadherin/N-cadherin蛋白,细胞凋亡相关的caspase3凋亡标志蛋白的变化情况。（5）构建ShFOXD3稳转细胞株,对裸鼠进行皮下种植瘤实验。4周后,处死裸... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

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个人简历
摘要
Abstract
前言
第一章 实验材料与方法
    第一节 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 常用试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 主要溶剂配制
    第二节 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 RNA干扰
        2.3 基因过表达
        2.4 建立稳转细胞株
        2.5 反转录PCR和实时荧光定量PCR
        2.6 Transwell小室迁移实验
        2.7 克隆形成实验
        2.8 蛋白免疫印迹实验
        2.9 免疫组化实验
        2.10 组织苏木精-伊红染色
        2.11 SRB法检测细胞活性
        2.12 细胞周期检测
        2.13 细胞凋亡检测
        2.14 数据整理以及统计学分析
第二章 实验结果与分析
    第一节 FOXD3抑制结肠癌细胞增殖
        1.1 FOXD3在结肠癌细胞中低表达
        1.2 SiRNA对FOXD3 mRNA和蛋白的抑制作用
        1.3 沉默FOXD3促进细胞增殖
        1.4 沉默FOXD3加快细胞周期
        1.5 本节小结
    第二节 FOXD3促进结肠癌细胞凋亡
        2.1 沉默FOXD3抑制细胞凋亡
        2.2 沉默FOXD3抑制Caspase3切割
        2.3 本节小结
    第三节 FOXD3抑制结肠癌细胞转移
        3.1 沉默FOXD3促进细胞迁移
        3.2 沉默FOXD3活化EMT相关信号通路
        3.3 本节小结
    第四节 FOXD3抑制EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路
        4.1 沉默FOXD3活化EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路
        4.2 沉默FOXD3通过EGFR引起MAPK信号通路变化
        4.3 细胞恢复实验证明FOXD3抑制MAPK信号通路
        4.4 本节小结
    第五节 小鼠皮下种植瘤和病人肿瘤组织中FOXD3低 表达 ，EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路蛋白高表达
        5.1 小鼠皮下种植瘤实验中抑制FOXD3能 够活化EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路
        5.2 病人肿瘤组织中FOXD3低表达，EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路蛋白高表达
        5.3 本节小结
第三章 总结与讨论
参考文献
综述
    第一节 RAS基因概述
    第二节 RAS突变与肿瘤
    第三节 RAS作为药物靶点的结构基础
    第四节 RAS作为药物靶点的治疗策略
    第五节 小结与展望
    综述参考文献
附录 缩略语表
致谢
本课题获得以下国家自然科学基金资助
硕士期间发表SCI文


【参考文献】：
期刊论文
[1]RAS-GTPase活化蛋白在肿瘤发生发展中作用的研究进展[J]. 张红凯,陈杰.  中国医学科学院学报. 2015(03)
[2]Colorectal carcinogenesis-update and perspectives[J]. Hans Raskov,Hans-Christian Pommergaard,Jakob Burcharth,Jacob Rosenberg.  World Journal of Gastroenterology. 2014(48)



本文编号：2965887