mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒的构建及体外杀伤喉癌细胞作用研究

发布时间：2021-01-18 02:43

　　目的:本研究旨在构建mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒,考察其形态、粒径、包封率、载药量等理化特性;体外干预喉癌Hep-2细胞,MTT法观察其对喉癌细胞的杀伤作用,为喉癌生物治疗的临床转化奠定基础。方法:1、设计3条Bmi-1 shRNA和1条NC序列,分别与PCO24-pGenesil-1质粒连接构建3组Bmi-1RNAi重组质粒和1组无效重组质粒,并测序鉴定;2、通过RT-qPCR的方法检测重组干扰质粒转染293T细胞后,Bmi-1基因的表达情况,并筛选出干扰效果最佳的干扰质粒。3、采用透析法制备mPEG-CS纳米载体,进行核磁共振氢谱表征（¹H-NMR）分析,琼脂糖凝胶电泳考察其DNA保护作用、基因包裹能力,MTT法考察其细胞毒性;4、采用超声振荡和简单络合的方法合成mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒,考察其形态、粒径和Zeta电位,计算包封率和载药量;5、MTT实验分为4组:PTX、mPEG-CS/PTX、mPEG-CS-cRGD/PTX和mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX组,分... 

【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCO24-pGenesil-1质粒示意图

mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒的构建及体外杀伤喉癌细胞作用研究26线是单峰，扩增曲线近乎平行说明对GAPDH和Bmi-1基因均进行了准确有效的扩增，且扩增效率基本一致，产物特异性好，无引物二聚体产生（图3B、3C）。三条Bmi-1shRNA在293T细胞中均有干扰下调效果，干扰后Bmi-1的相对表达量分别为0.118±0.003、0.124±0.017、0.172±0.007（表10、图3D）。后续实验将选用干扰效果最好的shRNA1组质粒与纳米载体构建纳米缓释微粒。表9紫外分光光度计检测RNA提取质量检测结果样品名称A260/A280RNA浓度(ng/uL)shRNA-nc1.93579shRNA31.89553shRNA21.92548shRNA11.91559图3ARNA琼脂糖凝胶电泳分析（1：shRNA-nc；2：shRNA3；3：shRNA2；4：shRNA1）123428S18S5S

mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒的构建及体外杀伤喉癌细胞作用研究27图3BGAPDH基因溶解扩增曲线图3CBmi-1shRNA基因溶解扩增曲线表10RT-qPCR数值分析（n=3）样本组2-△△Ct值第1次第2次第3次均数±标准差shRNA10.1150.1200.1200.118±0.003shRNA20.1360.1320.1040.124±0.017shRNA30.1700.1790.1660.172±0.007shRNA-nc1.0021.0020.9951.000±0.004


本文编号：2984108