环境浓度NP长期暴露对雄性大鼠甲状腺功能与增生性病变的影响及锌硒茶干预研究
发布时间：2021-01-23 11:04
目的:1)分析环境浓度NP长期暴露是否会影响雄性大鼠甲状腺激素水平及功能的稳态,探讨雌激素受体与甲状腺素受体在NP致甲状腺疾病中的表达情况。2)分析锌硒茶摄入对环境浓度NP长期暴露而引起的雄性大鼠甲状腺功能损伤及增生性病变的干预作用,探讨锌硒茶对NP致甲状腺功能损伤的保护作用机制。方法:240只雄性SD大鼠共分为7组（空白对照组,0.4mg/kg/d,4mg/kg/d,40mg/kg/d NP暴露组,30μg/kg/d E2组,普通茶治疗组,锌硒茶治疗组）。每日按体重灌胃,灌胃量为5ml/kg/day,连续灌胃染毒34周,茶叶干预组染毒NP剂量与高剂量组相同,第18周开始进行茶叶干预。染毒组分两次剖杀取材（17周、34周）,茶叶干预组于第34周剖杀取材。解剖前对大鼠进行甲状腺B超检查,利用ELISA法检测血清FT3、FT4、TSH水平,高效液相色谱法检测甲状腺组织和血清NP蓄积水平。甲状腺左叶用于透射电镜观察超微组织结构、HE切片观察大鼠甲状腺组织损伤情况、免疫组化切片比较ERα、ERβ,TRα、TRβ蛋白的表达情况。甲状腺右叶使用高效液相色谱法检测甲状腺组织中N...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同样品中NP蓄积水平有相关研究表示，NP会通过模拟雌激素的作用来破坏机体的内分泌功能[13]，
遵义医科大学硕士学位论文王林14图2大鼠染毒流程图1.4.1大鼠甲状腺B超图像采集解剖前一周于遵义医科大学药理学国家重点实验室，对大鼠进行甲状腺B超检查，实验大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg）麻醉，麻醉后剃毛取仰卧位，采集甲状腺B超图像，观察有无低回声区出现。1.4.2动物组织及血液采集大鼠分两次取材（分别持续灌胃染毒17周、34周），剖杀前隔夜禁食，剖杀当日采用腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg）对实验大鼠麻醉，麻醉后经腹主动脉取血（用于检测激素水平及血清NP含量，每只大鼠总取血量约为5mL），4℃冰箱内静置12h后离心取血清放置于-80℃冰箱备用；取血完成后，用剪刀将大鼠胸廓打开，沿气管找到甲状腺准确位置后，用剪刀迅速剥离甲状腺组织，甲状腺组织使用生理盐水洗净，置于滤纸吸干水分后称重，取左侧甲状腺组织浸泡在4％多聚甲醛或2.5%戊二醛溶液中固定（供切片实验及电镜图片采集使用），右侧甲状腺组织直接置于EP（Eppendorftube，EP）管内并于-80℃超低温冰箱中冻存备用（供HPLC、WesternBlot等实验使用）。
遵义医科大学硕士学位论文王林16单个样品检测时间：6.0min，出峰时间：3.5min。定量分析：样品处理后所得的峰面积与标准品所得的标准曲线相比较，计算得出样品中NP的实际浓度。质量控制：为避免洗涤剂中NP干扰，玻璃试管均用重铬酸浸泡后使用。试管清洗干净后，置于70℃烘箱烘干。使用前再用正己烷淋洗两次。图3HPLC法检测NP含量标准曲线1.4.6甲状腺组织病理学变化（1）常规组织学观察：左侧甲状腺组织称量后迅速放入装满4%多聚甲醛溶液的EP管中（溶液淹没组织）固定24h。通过脱水，透明，浸蜡，包埋，切片，贴片，烘片，二甲苯脱蜡，酒精梯度（100%，95%，80%，70%）渗水，苏木精染色，水洗，1%盐酸乙醇分化，漂洗，返蓝，流水冲洗，0.5%伊红复染，梯度酒精脱水（70%，80%，95%，100%），二甲苯透明，中性树胶封存等操作后，制成HE切片。于光学显微镜下观察甲状腺组织的形态学改变。使用ImajeJ软件采集HE切片图像中滤泡上皮厚度及单个滤泡面积定量数据。（2）超微组织结构观察：切取大鼠左侧甲状腺组织约1立方毫米组织，放入2.5%中性戊二醛中固定（4℃，2-4h），经0.1M磷酸缓冲液PBS漂洗（15min×3次），1%的锇酸·0.1M磷酸缓冲液PBS固定（20℃，2h），0.1M磷酸缓冲液PBS漂洗（15min×3次），组织脱水（组织依次入50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精-100%丙酮-100%丙酮，每次15min），渗透（丙酮︰812包埋剂=1︰1（2-4h），丙酮︰812
【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体在心搏骤停后脑损伤中的作用[J]. 陆礼萍,廉应涛,余追. 临床急诊杂志. 2018(11)
[2]全球甲状腺癌疾病负担[J]. 李斐,李舍予. 中国全科医学. 2018(26)
[3]环境内分泌干扰物对甲状腺功能影响的研究进展[J]. 刘博莹,王毅. 环境与健康杂志. 2018(08)
[4]高效液相色谱-串联质谱法测定食用植物油中4-壬基酚的含量[J]. 宋鑫,杭学宇,王芹,王露,冯晓青. 理化检验(化学分册). 2018(05)
[5]甲状腺结节的影响因素研究进展[J]. 王东梅,周茜,霍煜廷,于双,王淑荣. 中国普通外科杂志. 2018(05)
[6]凤冈锌硒茶对肥胖大鼠的清脂效果[J]. 李文梅,俞捷,胡斌丽,罗娅,杨静,杨雪松,许洁. 山东医药. 2018(13)
[7]致甲状腺肿环境化学物质及其可能作用机制[J]. 李丹丹,范轶欧,王炳玲,高汝钦,于维森,王天毅. 预防医学论坛. 2017(11)
[8]锌硒茶对壬基酚致大鼠代谢综合症的保护作用研究[J]. 杨静,俞捷,杨雪松,李文梅,许洁. 食品科技. 2017(06)
[9]锌硒茶对高脂高糖饮食致大鼠糖脂代谢紊乱的干预作用[J]. 李密转,杨静,王攀,许洁,杨雪松,俞捷. 实用医学杂志. 2017(04)
[10]珠三角水体及河蚬中双酚A和壬基酚含量调查[J]. 张悦君,曾丽璇. 广州化工. 2016(23)
硕士论文
[1]围产期母鼠暴露壬基酚对OVA诱导哮喘仔鼠的气道炎症作用[D]. 庹芳旭.遵义医科大学 2019
[2]环境内分泌干扰物多氯联苯118对大鼠甲状腺形态及功能影响的研究[D]. 汤金梅.南京医科大学 2013
本文编号：2995106
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同样品中NP蓄积水平有相关研究表示，NP会通过模拟雌激素的作用来破坏机体的内分泌功能[13]，
遵义医科大学硕士学位论文王林14图2大鼠染毒流程图1.4.1大鼠甲状腺B超图像采集解剖前一周于遵义医科大学药理学国家重点实验室，对大鼠进行甲状腺B超检查，实验大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg）麻醉，麻醉后剃毛取仰卧位，采集甲状腺B超图像，观察有无低回声区出现。1.4.2动物组织及血液采集大鼠分两次取材（分别持续灌胃染毒17周、34周），剖杀前隔夜禁食，剖杀当日采用腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg）对实验大鼠麻醉，麻醉后经腹主动脉取血（用于检测激素水平及血清NP含量，每只大鼠总取血量约为5mL），4℃冰箱内静置12h后离心取血清放置于-80℃冰箱备用；取血完成后，用剪刀将大鼠胸廓打开，沿气管找到甲状腺准确位置后，用剪刀迅速剥离甲状腺组织，甲状腺组织使用生理盐水洗净，置于滤纸吸干水分后称重，取左侧甲状腺组织浸泡在4％多聚甲醛或2.5%戊二醛溶液中固定（供切片实验及电镜图片采集使用），右侧甲状腺组织直接置于EP（Eppendorftube，EP）管内并于-80℃超低温冰箱中冻存备用（供HPLC、WesternBlot等实验使用）。
遵义医科大学硕士学位论文王林16单个样品检测时间：6.0min，出峰时间：3.5min。定量分析：样品处理后所得的峰面积与标准品所得的标准曲线相比较，计算得出样品中NP的实际浓度。质量控制：为避免洗涤剂中NP干扰，玻璃试管均用重铬酸浸泡后使用。试管清洗干净后，置于70℃烘箱烘干。使用前再用正己烷淋洗两次。图3HPLC法检测NP含量标准曲线1.4.6甲状腺组织病理学变化（1）常规组织学观察：左侧甲状腺组织称量后迅速放入装满4%多聚甲醛溶液的EP管中（溶液淹没组织）固定24h。通过脱水，透明，浸蜡，包埋，切片，贴片，烘片，二甲苯脱蜡，酒精梯度（100%，95%，80%，70%）渗水，苏木精染色，水洗，1%盐酸乙醇分化，漂洗，返蓝，流水冲洗，0.5%伊红复染，梯度酒精脱水（70%，80%，95%，100%），二甲苯透明，中性树胶封存等操作后，制成HE切片。于光学显微镜下观察甲状腺组织的形态学改变。使用ImajeJ软件采集HE切片图像中滤泡上皮厚度及单个滤泡面积定量数据。（2）超微组织结构观察：切取大鼠左侧甲状腺组织约1立方毫米组织，放入2.5%中性戊二醛中固定（4℃，2-4h），经0.1M磷酸缓冲液PBS漂洗（15min×3次），1%的锇酸·0.1M磷酸缓冲液PBS固定（20℃，2h），0.1M磷酸缓冲液PBS漂洗（15min×3次），组织脱水（组织依次入50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精-100%丙酮-100%丙酮，每次15min），渗透（丙酮︰812包埋剂=1︰1（2-4h），丙酮︰812
【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体在心搏骤停后脑损伤中的作用[J]. 陆礼萍,廉应涛,余追. 临床急诊杂志. 2018(11)
[2]全球甲状腺癌疾病负担[J]. 李斐,李舍予. 中国全科医学. 2018(26)
[3]环境内分泌干扰物对甲状腺功能影响的研究进展[J]. 刘博莹,王毅. 环境与健康杂志. 2018(08)
[4]高效液相色谱-串联质谱法测定食用植物油中4-壬基酚的含量[J]. 宋鑫,杭学宇,王芹,王露,冯晓青. 理化检验(化学分册). 2018(05)
[5]甲状腺结节的影响因素研究进展[J]. 王东梅,周茜,霍煜廷,于双,王淑荣. 中国普通外科杂志. 2018(05)
[6]凤冈锌硒茶对肥胖大鼠的清脂效果[J]. 李文梅,俞捷,胡斌丽,罗娅,杨静,杨雪松,许洁. 山东医药. 2018(13)
[7]致甲状腺肿环境化学物质及其可能作用机制[J]. 李丹丹,范轶欧,王炳玲,高汝钦,于维森,王天毅. 预防医学论坛. 2017(11)
[8]锌硒茶对壬基酚致大鼠代谢综合症的保护作用研究[J]. 杨静,俞捷,杨雪松,李文梅,许洁. 食品科技. 2017(06)
[9]锌硒茶对高脂高糖饮食致大鼠糖脂代谢紊乱的干预作用[J]. 李密转,杨静,王攀,许洁,杨雪松,俞捷. 实用医学杂志. 2017(04)
[10]珠三角水体及河蚬中双酚A和壬基酚含量调查[J]. 张悦君,曾丽璇. 广州化工. 2016(23)
硕士论文
[1]围产期母鼠暴露壬基酚对OVA诱导哮喘仔鼠的气道炎症作用[D]. 庹芳旭.遵义医科大学 2019
[2]环境内分泌干扰物多氯联苯118对大鼠甲状腺形态及功能影响的研究[D]. 汤金梅.南京医科大学 2013
本文编号：2995106
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