ERp57体外增强阿霉素抗乳腺癌及减轻心肌细胞毒性的作用研究
发布时间：2021-01-23 17:07
目的:阿霉素是一种有效治疗乳腺癌的化疗药物,但阿霉素在临床应用中会产生严重的心脏毒性。在前期的研究中发现丹参素衍生物BAA具有增强阿霉素抗乳腺癌并减轻心肌细胞毒性的作用,并发现ERp57是BAA的作用靶点之一。本文旨在探讨ERp57在体外对阿霉素抗乳腺癌和对心肌细胞毒性的干预作用及其相关作用机制。方法:1.ERp57体外增强阿霉素抗乳腺癌及减轻心肌细胞毒性干预作用的研究首先验证ERp57过表达的MDA-MB-231细胞和H9c2细胞模型,采用蛋白质免疫印迹法（Western Blot）确认过表达。然后加入不同浓度的阿霉素（1μM、2μM、4μM、8μM）处理细胞24 h后,采用乳酸脱氢酶试剂盒和MTT法检测细胞毒性和细胞存活率;在MDA-MB-231细胞和H9c2细胞（EV组和ERp57H组）中加入2μM阿霉素处理细胞24 h后,固定细胞,进行DAPI染色;野生型MDA-MB-231细胞和H9c2细胞采用瞬时转染siRNA方法使ERp57基因沉默,经Western Blot确认转染成功后,MTT法检测细胞存活率。2.ERp57体外增强阿霉素抗乳腺癌及减轻心肌细胞毒...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ERp57基因过表达MDA-MB-231细胞模型的验证（标尺=100μm）
遵义医科大学硕士学位论文师伟16图2ERp57过表达对MDA-MB-231细胞存活率和LDH释放量的影响（A）细胞存活率；（B）LDH释放量；Fig.2EffectofERp57onDox-inducedcellviabilityandLDHreleaseinMDA-MB-231cellsNote:*P<0.05vs.EVgroup;EV:emptyvectorMDA-MB-231group;ERp57H:ERp57highexpressionMDA-MB-231group.3.3ERp57基因过表达对阿霉素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的影响DAPI为一种能够与DNA结合的荧光染料，可以穿过完整的细胞膜与细胞核中的双链DNA结合，产生比DAPI自身强20多倍的荧光。经过DAPI染色后，正常细胞的细胞核核形完整，染色质均匀，且呈现低亮度的蓝色荧光，而凋亡的细胞细胞核破裂形成碎片，核解体，染色质也进一步固缩，形成很多颗粒物质且颜色加深。在图3中，我们明显观察到，EV组和ERp57H组中细胞核呈规则的椭圆状，颜色呈均匀蓝色低密度的荧光，但经阿霉素（2μM）加药处理24h后，细胞核数量显著减少，部分细胞的细胞核呈现出碎片状和致密浓染等典型的凋亡特征（结果中白色箭头所指），图中结果显示，与EV+Dox（空载体MDA-MB-231+Dox）组相比，ERp57H+Dox（ERp57过表达MDA-MB-231+Dox）组细胞凋亡明显减少（P*<0.05，图3B），由此说明，在MDA-MB-231细胞中，ERp57基因过表达可显著减少阿霉素诱导乳腺癌细胞的细胞凋亡。
遵义医科大学硕士学位论文师伟17图3ERp57基因过表达对阿霉素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的影响（标尺=100μm）（A）MDA-MB-231细胞DAPI染色照片；（B）细胞凋亡率统计结果；Fig.3EffectofoverexpressionofERp57onDox-inducedapoptosisinMDA-MB-231cellsNote:*P<0.05vs.EV+Doxgroup;EV:emptyvectorMDA-MB-231group;ERp57H:ERp57highexpressionMDA-MB-231group;EV+Dox:emptyvectorMDA-MB-231+Doxgroup;ERp57H+Dox:ERp57highexpressionMDA-MB-231+Doxgroup;Dox:doxorubicin.Scalebar:100μm.3.4ERp57基因沉默后对阿霉素诱导MDA-MB-231细胞存活率的影响采用瞬时转染siRNA干扰的方法使ERp57基因沉默。用WesternBlot方法检测ERp57蛋白含量表达变化情况。在图4中可以观察到，ERp57-siRNA干扰后，与阴性对照Scramble组相比，ERp57蛋白表达明显下调（P*<0.05，图4A），表明ERp57-siRNA干扰成功。对ERp57基因沉默后的细胞进行细胞存活率检测，加入不同浓度的阿霉素处理24h后，MTT法检测细胞存活率，从结果中可以看出，在MDA-MB-231细胞中，与阴性对照Scramble组相比，ERp57-siRNA基因沉默后细胞存活率进一步降低（P*<0.05，图4B）。实验结果显示，在乳腺癌细胞MDA-MB-231中，ERp57基因沉默后可显著降低阿霉素诱导的乳腺癌细胞的细胞存活率。
【参考文献】：
期刊论文
[1]内质网应激在肝脏糖脂代谢及代谢性肝病中的作用[J]. 程涵博,吕颂雅,刘勇. 中国细胞生物学学报. 2019(11)
[2]内质网应激相关蛋白在阿霉素诱导的急性心肌损伤中的表达及意义[J]. 万军,王震,叶晶,吉庆伟,刘伶,施莹,林英忠. 中华老年心脑血管病杂志. 2017(12)
[3]内质网应激与肿瘤关系的研究进展[J]. 钟强,陈小伍,朱达坚. 广东医学. 2015(12)
[4]蛋白质二硫键异构酶A3——疾病治疗的新靶点[J]. 胡玥,陶丽媛,吕宾. 中国病理生理杂志. 2015(06)
[5]内质网应激的细胞效应分子机制[J]. 马光斌,陆伦根. 生命科学. 2012(03)
[6]siRNA沉默ERp57对细胞中CRT表达与定位的影响[J]. 杨建林,韩钰,王艳林. 生物技术通报. 2012(01)
[7]药物心脏毒性反应与药物警戒[J]. 刘蓓菁. 药物流行病学杂志. 2011(04)
[8]缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞内质网应激反应[J]. 马青变,高炜,郭艳红,赵春玉,薛林,唐朝枢. 北京大学学报(医学版). 2005(04)
[9]内质网应激反应分子机理研究进展[J]. 李载权,周爱儒,唐朝枢. 中国生物化学与分子生物学报. 2004(03)
博士论文
[1]人精子冷冻复苏过程中能量代谢功能紊乱的相关机制研究[D]. 傅龙龙.北京协和医学院 2019
本文编号：2995587
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ERp57基因过表达MDA-MB-231细胞模型的验证（标尺=100μm）
遵义医科大学硕士学位论文师伟16图2ERp57过表达对MDA-MB-231细胞存活率和LDH释放量的影响（A）细胞存活率；（B）LDH释放量；Fig.2EffectofERp57onDox-inducedcellviabilityandLDHreleaseinMDA-MB-231cellsNote:*P<0.05vs.EVgroup;EV:emptyvectorMDA-MB-231group;ERp57H:ERp57highexpressionMDA-MB-231group.3.3ERp57基因过表达对阿霉素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的影响DAPI为一种能够与DNA结合的荧光染料，可以穿过完整的细胞膜与细胞核中的双链DNA结合，产生比DAPI自身强20多倍的荧光。经过DAPI染色后，正常细胞的细胞核核形完整，染色质均匀，且呈现低亮度的蓝色荧光，而凋亡的细胞细胞核破裂形成碎片，核解体，染色质也进一步固缩，形成很多颗粒物质且颜色加深。在图3中，我们明显观察到，EV组和ERp57H组中细胞核呈规则的椭圆状，颜色呈均匀蓝色低密度的荧光，但经阿霉素（2μM）加药处理24h后，细胞核数量显著减少，部分细胞的细胞核呈现出碎片状和致密浓染等典型的凋亡特征（结果中白色箭头所指），图中结果显示，与EV+Dox（空载体MDA-MB-231+Dox）组相比，ERp57H+Dox（ERp57过表达MDA-MB-231+Dox）组细胞凋亡明显减少（P*<0.05，图3B），由此说明，在MDA-MB-231细胞中，ERp57基因过表达可显著减少阿霉素诱导乳腺癌细胞的细胞凋亡。
遵义医科大学硕士学位论文师伟17图3ERp57基因过表达对阿霉素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的影响（标尺=100μm）（A）MDA-MB-231细胞DAPI染色照片；（B）细胞凋亡率统计结果；Fig.3EffectofoverexpressionofERp57onDox-inducedapoptosisinMDA-MB-231cellsNote:*P<0.05vs.EV+Doxgroup;EV:emptyvectorMDA-MB-231group;ERp57H:ERp57highexpressionMDA-MB-231group;EV+Dox:emptyvectorMDA-MB-231+Doxgroup;ERp57H+Dox:ERp57highexpressionMDA-MB-231+Doxgroup;Dox:doxorubicin.Scalebar:100μm.3.4ERp57基因沉默后对阿霉素诱导MDA-MB-231细胞存活率的影响采用瞬时转染siRNA干扰的方法使ERp57基因沉默。用WesternBlot方法检测ERp57蛋白含量表达变化情况。在图4中可以观察到，ERp57-siRNA干扰后，与阴性对照Scramble组相比，ERp57蛋白表达明显下调（P*<0.05，图4A），表明ERp57-siRNA干扰成功。对ERp57基因沉默后的细胞进行细胞存活率检测，加入不同浓度的阿霉素处理24h后，MTT法检测细胞存活率，从结果中可以看出，在MDA-MB-231细胞中，与阴性对照Scramble组相比，ERp57-siRNA基因沉默后细胞存活率进一步降低（P*<0.05，图4B）。实验结果显示，在乳腺癌细胞MDA-MB-231中，ERp57基因沉默后可显著降低阿霉素诱导的乳腺癌细胞的细胞存活率。
【参考文献】：
期刊论文
[1]内质网应激在肝脏糖脂代谢及代谢性肝病中的作用[J]. 程涵博,吕颂雅,刘勇. 中国细胞生物学学报. 2019(11)
[2]内质网应激相关蛋白在阿霉素诱导的急性心肌损伤中的表达及意义[J]. 万军,王震,叶晶,吉庆伟,刘伶,施莹,林英忠. 中华老年心脑血管病杂志. 2017(12)
[3]内质网应激与肿瘤关系的研究进展[J]. 钟强,陈小伍,朱达坚. 广东医学. 2015(12)
[4]蛋白质二硫键异构酶A3——疾病治疗的新靶点[J]. 胡玥,陶丽媛,吕宾. 中国病理生理杂志. 2015(06)
[5]内质网应激的细胞效应分子机制[J]. 马光斌,陆伦根. 生命科学. 2012(03)
[6]siRNA沉默ERp57对细胞中CRT表达与定位的影响[J]. 杨建林,韩钰,王艳林. 生物技术通报. 2012(01)
[7]药物心脏毒性反应与药物警戒[J]. 刘蓓菁. 药物流行病学杂志. 2011(04)
[8]缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞内质网应激反应[J]. 马青变,高炜,郭艳红,赵春玉,薛林,唐朝枢. 北京大学学报(医学版). 2005(04)
[9]内质网应激反应分子机理研究进展[J]. 李载权,周爱儒,唐朝枢. 中国生物化学与分子生物学报. 2004(03)
博士论文
[1]人精子冷冻复苏过程中能量代谢功能紊乱的相关机制研究[D]. 傅龙龙.北京协和医学院 2019
本文编号：2995587
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/2995587.html
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