DON对Th17/iTreg细胞分化平衡的影响及其对EAE的防治效果研究
发布时间：2021-01-25 01:30
目的:通过谷氨酰胺酶抑制剂DON干预谷氨酰胺分解途径,研究其对C57BL/6小鼠T细胞增殖的影响及对EAE疾病进程的防治效果,阐明DON对小鼠Th17与iTreg细胞分化的调节作用,进而为Th17介导的相关性疾病（如MS）防治药物的设计、开发提供一条新颖的途径。方法:1、分离出C57BL/6小鼠的脾脏,用0.2、0.5、1.0 μMCFSE对细胞进行染色,优化CFSE染色条件。利用分选试剂盒从脾细胞中分选出T细胞与CD4+T细胞,研究DON对T细胞增殖的影响。2、制备初始CD4+T细胞与抗原提呈细胞悬液,在培养基中加入促进Th17细胞分化的相关细胞因子和抗体（如anti-mCD3/CD28、IL-6、TGF-β、anti-mIL-4、anti-mIFN-γ和 anti-mIL-2）;或在anti-mCD3/CD28预包被的细胞培养板中加入初始CD4+T细胞悬液,再加入促进iTreg细胞分化的相关细胞因子（包括TGF-β和IL-2）,体外刺激初始细胞朝着Th17或iTreg细胞分化,优化并确立细胞的最佳分化条件。3、在确立的最佳分化条件的基础上,将不同浓度的DON作用于细胞,流式细胞术分...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图４．１．１?ＣＦＳＥ的最佳染色条件??Ｆｉｇ?４．１．１?Ｏｐｔｉｍａｌ?ｄｙｅｉｎｇ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｆｏｒ?ＣＦＳＥ??２１??
?南华大学项士学位论文???４．１．２?ＤＯＮ对ＣＤ４＋Ｔ细胞和ＣＤ８＋Ｔ细胞增殖的影响??将纯化的Ｔ细胞进行ＣＦＳＥ染色后，以每孔ｌｘｌ〇６个加入到４８孔板中。在??５％Ｃ０２、３７。。恒温培养箱中培养３天。实验分为空白对照组和ＤＯＮ?（ＩｍＭ）处??理组。用流式细胞仪检测ＣＤ４—Ｔ细胞和ＣＤ８＋Ｔ细胞的増殖情况，流式结果发现，??与对照组相比，ＤＯＮ处理组的荧光强度增大，峰值往右移动，细胞的增殖能力??下降。说明ＤＯＮ处理组可抑制ＣＤ４＋Ｔ和ＣＤ８＋Ｔ细胞的增殖（图４．１．２）。??ＣＤ４＋丁细胞?ＣＤ８＋Ｔ细胞??８０３－?，??５００－??４００?－?６０３?－??Ｃｔｒｌ?Ｉ?３Ｋ：?＊?■瞥?Ｉ??ｔｉＵ?ｉｉＵ??〇?１０＊?ｔ〇４?ｔＯ＊?０?丨?０＊?１０?１０?１０??Ｃｏｍｐ－ＦＩＴＣ－Ａ?Ｃｏｍｓ－ＦＩＴＣ－Ａ??２００：?４００－?Ｉ??ＤＯＮ?５?，０°：?＾?Ｉ??…ｆ?Ｖ?１：：，．?／?Ｖ?．??ｏ?ｉｏ２?ｉｏ３?１０４?１０５?０?１０２?１０３?ｔｏ４?ｉｏ５??Ｃｏｍｐ－ＦＩＴＣ－Ａ?Ｃ〇ｍｐ－ＦＩＴＣ－Ａ??ｎ??Ｃｔｒｌ?—?Ｉ?ｉ?ｆ??１?ｂ?！?１｜??２?ｍ?１?ｌ??＊？?３?４?＜?）■．，■＞！，《ｎｔ＞ｊ?■?１?■■■—ｉ?????０，〇＇?，〇?，〇?’。?０?，０２?，０３?，０＊?，ｏｓ??Ｃｏｒｒｉｐ－ＦＩＴＣ－Ａ??Ｃ〇ｍｐ－Ｆ（ＴＣ－Ａ??图４．１．２?ＤＯＮ对ＣＤ４＋Ｔ和ＣＤ８＋Ｔ细胞增殖的影响??Ｆｉｇ?４．１．２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＤＯＮ?ｏｎ?ｐｒｏｌ
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本文编号：2998292
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图４．１．１?ＣＦＳＥ的最佳染色条件??Ｆｉｇ?４．１．１?Ｏｐｔｉｍａｌ?ｄｙｅｉｎｇ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｆｏｒ?ＣＦＳＥ??２１??
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本文编号：2998292
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