弓形虫ROP17抗体的制备、分布及其功能与机制的初步研究

发布时间：2021-01-30 21:16

　　目的:纯化原核表达的刚地弓形虫棒状体17蛋白（Rhoptry protein17,ROP17）,制备其多克隆抗体,并进行效价和免疫源性鉴定。构建二氢叶酸还原酶-胸苷酸合成酶-TgROP17真核表达载体（pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17）,转染人胚肾细胞（HEK 293T）中,血清饥饿后对ROP17参与自噬调控的作用及其机制进行初步研究。方法:第一部分:将重组质粒pGEX-6P-1-ROP17转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,并用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。通过亲和层析法纯化重组蛋白（GST-ROP17）,纯化蛋白免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并用蛋白质印迹（Western blotting）对其进行免疫源性鉴定。第二部分:以弓形虫速殖子总RNA为模板,构建重组载体pIRES/TgDHFR-TS和重组质粒pIRES/TgDHFR-TS-TgROP17。经菌液PCR、双酶切和测序鉴定后,将重组载体转染人胚肾细胞（HEK 293T）,RT-PCR和Western blotting检测基因和蛋白的表达。第三部分:通过免疫组化观察感染弓形虫BALB/c小鼠的脑组织中自... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ROP17重组蛋白的诱导表达Fig1-1InducedexpressionofrecombinantROP17protein

山西医科大学硕士学位论文14图1-2纯化ROP17蛋白的分析M:蛋白质标准分子量1：纯化的ROP17蛋白Fig1-2AnalysisofpurifiedROP17proteinM:proteinstandardmolecularweight1:purifiedGST-ROP17protein2.3ELISA检测多克隆抗体效价纯化的ROP17蛋白三次免疫SD大鼠后，腹主动采血法采集血清，ELISA法检测多克隆抗体的效价，第三次免疫后的多克隆抗体效价＞1：512000，检测结果（表1.1及图1-2.3）所示：表1.1ELISA法检测抗体效价图1-3ELISA法检测抗体效价结果SD大鼠抗体效价Fig1-3ResultsofantibodytiterdetectedbyELISAAntibodytiterofSDrats抗体效价阴性对照空白对照1：10001:20001:40001:80001:160001:320001:640001:1280001:2560001:512000大鼠0.18760.18622.21082.08791.67101.29340.94550.63500.47190.37480.27260.2638

山西医科大学硕士学位论文14图1-2纯化ROP17蛋白的分析M:蛋白质标准分子量1：纯化的ROP17蛋白Fig1-2AnalysisofpurifiedROP17proteinM:proteinstandardmolecularweight1:purifiedGST-ROP17protein2.3ELISA检测多克隆抗体效价纯化的ROP17蛋白三次免疫SD大鼠后，腹主动采血法采集血清，ELISA法检测多克隆抗体的效价，第三次免疫后的多克隆抗体效价＞1：512000，检测结果（表1.1及图1-2.3）所示：表1.1ELISA法检测抗体效价图1-3ELISA法检测抗体效价结果SD大鼠抗体效价Fig1-3ResultsofantibodytiterdetectedbyELISAAntibodytiterofSDrats抗体效价阴性对照空白对照1：10001:20001:40001:80001:160001:320001:640001:1280001:2560001:512000大鼠0.18760.18622.21082.08791.67101.29340.94550.63500.47190.37480.27260.2638


本文编号：3009600