低氧预处理人羊膜间充质干细胞对放射性损伤鼠涎腺上皮细胞修复作用的研究
发布时间：2021-02-06 22:13
目的:研究低氧预处理人羊膜间充质干细胞是否对鼠放射性损伤涎腺上皮细胞具有保护及功能修复作用。方法:（1）3天大的SD大鼠新生鼠取其双侧下颌下腺腺体组织,利用酶消化法分离下颌下腺的细胞,胰蛋白酶差速消化法和差速贴壁法纯化原代细胞;（2）下颌下腺细胞传至P2时,使用免疫组织化学法对细胞的角蛋白7（CK-7）进行鉴定;（3）遵义医科大学组织工程实验室提供P3人羊膜间充质干细胞,并行流式细胞仪行细胞表型鉴定;（4）实验分为4组;空白对照组（颌下腺上皮细胞未行放射处理组）、5Gy放射对照组（颌下腺上皮细胞行5Gy放射处理但不和hAMSCs共培养组）、低氧共培养组（低氧预处理hAMSCs和颌下腺上皮细胞5Gy放射后共培养7天组）、常氧共培养组（hAMSCs和颌下腺上皮细胞5Gy放射后共培养处理7天组）;（5）利用电子直线加速器对P3代大鼠下颌下腺上皮细胞行5Gy放射处理;（6）按既定分组共培养7天后,分别收集每组细胞上清液,使用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组下颌下腺上皮细胞唾液淀粉酶α1（AMY1）的含量;CCK-8（Cell Counting Kit-8）技术检测各组细胞的增殖活性;An...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
倒置相差显微镜下观察A.SD大鼠SMGCs原代培养第4天（×2
遵义医科大学硕士学位论文孔维平182结果2.1SD大鼠颌下腺细胞镜下形态学特征原代培养4天后镜下可见贴壁的上皮细胞，镜下可见少量成纤维细胞混杂（见图1A），胰蛋白酶差速消化法和差速贴壁法去除成纤维细胞后可得到形态较为均一的鼠下颌下腺上皮细胞，第12天镜下可见细胞呈多角形，呈鹅卵石样排列（见图1B）。图1.倒置相差显微镜下观察原代SD大鼠SMGCs形态A.SD大鼠SMGCs原代培养第4天（×200）；B.SD大鼠SMGCs纯化后（×400）2.2SD大鼠下颌下腺细胞的免疫学鉴定利用角蛋白（CK7）作为颌下腺上皮细胞的标记蛋白。镜下观察可见CK7呈橙红色染色（图2A），CK7呈阳性表达，证实细胞为上皮来源，PBS液为阴性对照组（图2B）。图2.荧光显微镜下观察CK7免疫荧光A.CK7组（×400）；B.PBS对照组（×400）2.3hAMSCs的生长形态及鉴定hAMSCs的P3细胞形态均一，呈长梭形、类漩涡状生长(图3A)，符合目前国际公认hAMSCs的镜下形态学特征。P3细胞免疫组化流式结果回示示P3
遵义医科大学硕士学位论文孔维平19hAMSCs阳性表达CD44、CD73、CD90、CD105，阴性表达CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR(图3B)，符合目前国际公认hAMSCs的标记物检测标准。图3.P3hAMSCs形态和鉴定A.P3hAMSCs形态；B.P3hAMSCs流式鉴定结果2.4共培养7天后各组唾液α-淀粉酶含量测定结果各组细胞按既定分组共培养7天后，使用ELISA对各组下颌下腺上皮细胞培养48h后上清液中α-淀粉酶含量进行测定，结果示：空白对照组明显高于低氧/
【参考文献】：
期刊论文
[1]IGF-1对2,5-己二酮诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的拮抗作用研究[J]. 白秋芳,邹明,张继志,刘卓,朴丰源. 大连医科大学学报. 2020(01)
[2]Adult neural stem cell plasticity[J]. Elizabeth J.Sandquist,Donald S.Sakaguchi. Neural Regeneration Research. 2019(02)
[3]与羊膜上皮细胞共培养对羊膜间充质干细胞生物学特性的影响[J]. 冉黎婧,曾云,王少春,张递思,依香为,洪敏,李少遊,董坚,杜明钰,史明霞. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2018(06)
[4]Nerve growth factor promotes in vitro proliferation of neural stem cells from tree shrews[J]. Liu-lin Xiong,Zhi-wei Chen,Ting-hua Wang. Neural Regeneration Research. 2016(04)
[5]人羊膜干细胞:再生医学的理想种子细胞资源[J]. 肖建辉. 遵义医学院学报. 2015(05)
[6]涎腺肿瘤放射治疗的新进展[J]. 王中和. 口腔颌面外科杂志. 2010(03)
[7]颌下腺移位术干预急性放射性口腔黏膜反应及口干燥症的临床研究[J]. 周具华,高下,汪永干. 华西医学. 2010(02)
[8]高压氧治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响[J]. 王晓莉,赵岩松,杨于嘉,谢岷. 中华物理医学与康复杂志. 2009 (05)
硕士论文
[1]大鼠颌下腺上皮细胞放射性损伤模型的建立与评估[D]. 曹璐.遵义医科大学 2019
[2]低氧预处理人羊膜间充质干细胞修复放射性涎腺损伤功能的研究[D]. 王英鑫.遵义医学院 2018
[3]角质细胞生长因子-2对烟雾吸入所致肺损伤修复作用的实验研究[D]. 江政英.南昌大学 2017
[4]低氧预处理人羊膜间充质干细胞生物学特征研究[D]. 代敏.遵义医学院 2018
本文编号：3021175
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
倒置相差显微镜下观察A.SD大鼠SMGCs原代培养第4天（×2
遵义医科大学硕士学位论文孔维平182结果2.1SD大鼠颌下腺细胞镜下形态学特征原代培养4天后镜下可见贴壁的上皮细胞，镜下可见少量成纤维细胞混杂（见图1A），胰蛋白酶差速消化法和差速贴壁法去除成纤维细胞后可得到形态较为均一的鼠下颌下腺上皮细胞，第12天镜下可见细胞呈多角形，呈鹅卵石样排列（见图1B）。图1.倒置相差显微镜下观察原代SD大鼠SMGCs形态A.SD大鼠SMGCs原代培养第4天（×200）；B.SD大鼠SMGCs纯化后（×400）2.2SD大鼠下颌下腺细胞的免疫学鉴定利用角蛋白（CK7）作为颌下腺上皮细胞的标记蛋白。镜下观察可见CK7呈橙红色染色（图2A），CK7呈阳性表达，证实细胞为上皮来源，PBS液为阴性对照组（图2B）。图2.荧光显微镜下观察CK7免疫荧光A.CK7组（×400）；B.PBS对照组（×400）2.3hAMSCs的生长形态及鉴定hAMSCs的P3细胞形态均一，呈长梭形、类漩涡状生长(图3A)，符合目前国际公认hAMSCs的镜下形态学特征。P3细胞免疫组化流式结果回示示P3
遵义医科大学硕士学位论文孔维平19hAMSCs阳性表达CD44、CD73、CD90、CD105，阴性表达CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR(图3B)，符合目前国际公认hAMSCs的标记物检测标准。图3.P3hAMSCs形态和鉴定A.P3hAMSCs形态；B.P3hAMSCs流式鉴定结果2.4共培养7天后各组唾液α-淀粉酶含量测定结果各组细胞按既定分组共培养7天后，使用ELISA对各组下颌下腺上皮细胞培养48h后上清液中α-淀粉酶含量进行测定，结果示：空白对照组明显高于低氧/
【参考文献】：
期刊论文
[1]IGF-1对2,5-己二酮诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的拮抗作用研究[J]. 白秋芳,邹明,张继志,刘卓,朴丰源. 大连医科大学学报. 2020(01)
[2]Adult neural stem cell plasticity[J]. Elizabeth J.Sandquist,Donald S.Sakaguchi. Neural Regeneration Research. 2019(02)
[3]与羊膜上皮细胞共培养对羊膜间充质干细胞生物学特性的影响[J]. 冉黎婧,曾云,王少春,张递思,依香为,洪敏,李少遊,董坚,杜明钰,史明霞. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2018(06)
[4]Nerve growth factor promotes in vitro proliferation of neural stem cells from tree shrews[J]. Liu-lin Xiong,Zhi-wei Chen,Ting-hua Wang. Neural Regeneration Research. 2016(04)
[5]人羊膜干细胞:再生医学的理想种子细胞资源[J]. 肖建辉. 遵义医学院学报. 2015(05)
[6]涎腺肿瘤放射治疗的新进展[J]. 王中和. 口腔颌面外科杂志. 2010(03)
[7]颌下腺移位术干预急性放射性口腔黏膜反应及口干燥症的临床研究[J]. 周具华,高下,汪永干. 华西医学. 2010(02)
[8]高压氧治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响[J]. 王晓莉,赵岩松,杨于嘉,谢岷. 中华物理医学与康复杂志. 2009 (05)
硕士论文
[1]大鼠颌下腺上皮细胞放射性损伤模型的建立与评估[D]. 曹璐.遵义医科大学 2019
[2]低氧预处理人羊膜间充质干细胞修复放射性涎腺损伤功能的研究[D]. 王英鑫.遵义医学院 2018
[3]角质细胞生长因子-2对烟雾吸入所致肺损伤修复作用的实验研究[D]. 江政英.南昌大学 2017
[4]低氧预处理人羊膜间充质干细胞生物学特征研究[D]. 代敏.遵义医学院 2018
本文编号：3021175
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