橙黄决明素浸膏对高脂血症大鼠肝代谢作用研究
发布时间：2021-03-01 18:56
目的:本研究采用基于超高效液相色谱-飞行时间质谱仪（UPLC-QTOF-MS）分析方法的非靶向代谢组学技术研究橙黄决明素对高脂血症大鼠的治疗效果,运用化学计量学寻找与高脂血症相关的代谢物,并探讨橙黄决明素干预后对潜在代谢物的影响,从而初步阐明橙黄决明素的作用机制,为其在临床实践中的合理应用提供理论依据。方法:随机将大鼠分成2组,对照组（10只）:普通饲料喂养;高脂血症模型组（30只）:高脂饲料喂养。两组均于7天后尾静脉取血检测其生化指标,确认造模效果。之后将30只高脂血症模型大鼠随机分成3组,分别为模型组（10只）、橙黄决明素组（10只）和阿托伐他汀组（10只）。阿托伐他汀组灌胃阿托伐他汀10mg/（kg·d）,橙黄决明素组灌胃橙黄决明素3.6mg/（kg·d）,模型组和对照组灌胃等量的水,继续高脂饲料喂养30天后,处理大鼠,收集肝组织和血浆。血浆用于生化指标检测。对肝组织进行预处理,之后运用UPLC-Q-TOF-MS分析,得到的数据利用仪器自带软件进行整合,导入SMICA-P14.1和MATLAB软件进行主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）以及随机森林分析,使用变...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２代谢组学分析的流程??Ｆｉｇ．?１－２?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ??
３５００ｒ／ｍｉｎ离心６ｍｉｎ，取??血浆和肝组织于－８０°Ｃ下保存，用于生化指标检测和ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ－ＭＳ检测（实验经??过湖南省人民医院医学伦理委员会通过）。??２．２．２生化指标检测??取１００｜ｉＬ血浆样本，使用ＢｅｃｋｍａｎＡＵ２７００全自动生化分析仪进行分析，分别测??出每个样本的甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ－Ｃ）、??总胆固醇（ＴＣＭ直等参数，之后得到结果。??２．２．３样品前处理??精确称取６０ｍｇ肝组织样本后，具体操作如图２－１所示。??６０ｍｇ肝组织样品??加入８００叫甲醇水溶液（ＣＨ３０Ｈ：Ｈ２０ｖ：ｖ＝４：ｌ）???４???加入两个小钢珠，在－８０°Ｃ冰箱中放置５?ｍｉｎ???４???研磨机中研磨（６０?Ｈｚ，?２?ｍｉｎ）???３Ｅ???超声提取丨０?ｍｉｎ，?－２０?°ｄ争置３０?ｍｉｎ；???４???低温离心丨Ｏｍｉｎ?（１５０００ｒｐｍ，?４°Ｃ），取２０〇ｈＬ的上清液装样分析，??图２－１样品预处理流程??Ｆｉｇ．２－１?Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓａｍｐｌｅ??５??
?硕士学位论文???图３－１正（Ｅ）和负（Ｆ）离子模式下四组大鼠血清的代表性基峰色谱图（ＢＰＣ）??Ｆｉｇ．３－１?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｂａｓｅ?ｐｅａｋ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ（ＢＰＣ）?ｏｆ?ｓｅｒｕｍ?ｏｂｔａｉｎｅｄ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｇｒｏｕｐ?ｏｆ??ｒａｔｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ（Ｅ）?ａｎｄ?ｎｅｇａｔｉｖｅ（Ｆ）?ｉｏｎ?ｍｏｄｅ??Ａ对照组?Ｂ模型组?Ｃ橙黄决明素组Ｄ阿伐他汀组??Ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?Ｂ?Ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ?Ｃ?Ａｕｒａｎｔｉｏ－ｏｂｔｕｓｉｎ?ｇｒｏｕｐ?Ｄ?Ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ?ｇｒｏｕｐ??３．２．２．２主成分分析（ＰＣＡ）??对整合过后的数据进行ＰＣＡ分析，用到的是ＳＭＩＣＡ－Ｐ?１４．１软件。得到如３－２??图所示结果。从图中可以看出正负离子模式下对照组和模型组能分开并各自聚??合，ＱＣ在一定范围内聚集。橙黄决明素组相对比与模型组更接近对照组，正离子模??式下的四组对比不是很明显，还不能分开，负离子模式下可看出橙黄决明素组相比??较于阿托伐他汀组更接近对照组，但四组不能完全分开。由于ＰＣＡ对离群点较为??敏感，为了能得到较为显著的组间差异，我们尝试选用更高要求的化学计量学模式??识别方法。偏最小二乘判别分析斤１＾＞０人）是＿种更为强调组间差异的模式识别??方法，可以筛选出与反应没有直接关系的变化，使得结果更可靠，更容易理解，判别??能力明显优于ＰＣＡ＿。??ＰＣＡ－Ｘ?＃ａ?ＰＣＡ－Ｘ?＃ａ?ＰＣＡ－Ｘ?＃ａ??■?Ｂ?■?Ｂ?■?Ｂ??▲?ＱＣ?Ｍ?ＶＣ?Ａ?Ｃ??１５〇〇：?■?＾?１５００：
【参考文献】：
期刊论文
[1]高脂血症相关疾病发病机制研究进展[J]. 李艳,孙珂焕,白芳,罗焕敏,吴正治. 辽宁中医药大学学报. 2019(04)
[2]多不饱和脂肪酸的来源及生理功能研究[J]. 靳革,李娟,齐悦,杨勇. 饲料博览. 2018(04)
[3]载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病肾病相关性的研究进展[J]. 郭佳,柯亭羽. 医学综述. 2018(08)
[4]老年冠心病急性发作期病人血清同型半胱氨酸与LPL基因多态性相关分析[J]. 黎才丽,黄勇,许政衡. 中西医结合心脑血管病杂志. 2017(21)
[5]过氧化物酶体增殖物激活受体γ对脏器损伤保护作用的研究进展[J]. 丁瑞文,何妹仪,李志鹏,王美容,柳垂亮. 医学综述. 2017(21)
[6]冠心病合并高脂血症患者血脂水平与主要炎症因子的相关性[J]. 沈正军. 心血管康复医学杂志. 2017(04)
[7]2型糖尿病伴高脂血症患者氧化应激反应与血脂代谢紊乱的关系研究[J]. 马尧,姜维娜,江红. 临床和实验医学杂志. 2017(11)
[8]益生菌干预对高脂高糖饮食诱导肥胖小鼠肠道菌群及脂代谢影响的研究[J]. 孙兆男,张卫东,杨云竣,尹宇振,张烨,郭艳杰,袁杰利. 中国微生态学杂志. 2017(02)
[9]高脂饮食喂养建立高脂血症模型的验证及规律探讨[J]. 王燕萍,彭丹虹,刘晓琪,谢蓉,李先涛. 中国比较医学杂志. 2017(01)
[10]载脂蛋白CⅢ的研究现状[J]. 靳景璐,李建军,郭远林. 中国动脉硬化杂志. 2016(10)
本文编号：3057887
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２代谢组学分析的流程??Ｆｉｇ．?１－２?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ??
３５００ｒ／ｍｉｎ离心６ｍｉｎ，取??血浆和肝组织于－８０°Ｃ下保存，用于生化指标检测和ＵＰＬＣ－ＱＴＯＦ－ＭＳ检测（实验经??过湖南省人民医院医学伦理委员会通过）。??２．２．２生化指标检测??取１００｜ｉＬ血浆样本，使用ＢｅｃｋｍａｎＡＵ２７００全自动生化分析仪进行分析，分别测??出每个样本的甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ－Ｃ）、??总胆固醇（ＴＣＭ直等参数，之后得到结果。??２．２．３样品前处理??精确称取６０ｍｇ肝组织样本后，具体操作如图２－１所示。??６０ｍｇ肝组织样品??加入８００叫甲醇水溶液（ＣＨ３０Ｈ：Ｈ２０ｖ：ｖ＝４：ｌ）???４???加入两个小钢珠，在－８０°Ｃ冰箱中放置５?ｍｉｎ???４???研磨机中研磨（６０?Ｈｚ，?２?ｍｉｎ）???３Ｅ???超声提取丨０?ｍｉｎ，?－２０?°ｄ争置３０?ｍｉｎ；???４???低温离心丨Ｏｍｉｎ?（１５０００ｒｐｍ，?４°Ｃ），取２０〇ｈＬ的上清液装样分析，??图２－１样品预处理流程??Ｆｉｇ．２－１?Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓａｍｐｌｅ??５??
?硕士学位论文???图３－１正（Ｅ）和负（Ｆ）离子模式下四组大鼠血清的代表性基峰色谱图（ＢＰＣ）??Ｆｉｇ．３－１?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｂａｓｅ?ｐｅａｋ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ（ＢＰＣ）?ｏｆ?ｓｅｒｕｍ?ｏｂｔａｉｎｅｄ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｇｒｏｕｐ?ｏｆ??ｒａｔｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ（Ｅ）?ａｎｄ?ｎｅｇａｔｉｖｅ（Ｆ）?ｉｏｎ?ｍｏｄｅ??Ａ对照组?Ｂ模型组?Ｃ橙黄决明素组Ｄ阿伐他汀组??Ａ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?Ｂ?Ｍｏｄｅｌ?ｇｒｏｕｐ?Ｃ?Ａｕｒａｎｔｉｏ－ｏｂｔｕｓｉｎ?ｇｒｏｕｐ?Ｄ?Ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ?ｇｒｏｕｐ??３．２．２．２主成分分析（ＰＣＡ）??对整合过后的数据进行ＰＣＡ分析，用到的是ＳＭＩＣＡ－Ｐ?１４．１软件。得到如３－２??图所示结果。从图中可以看出正负离子模式下对照组和模型组能分开并各自聚??合，ＱＣ在一定范围内聚集。橙黄决明素组相对比与模型组更接近对照组，正离子模??式下的四组对比不是很明显，还不能分开，负离子模式下可看出橙黄决明素组相比??较于阿托伐他汀组更接近对照组，但四组不能完全分开。由于ＰＣＡ对离群点较为??敏感，为了能得到较为显著的组间差异，我们尝试选用更高要求的化学计量学模式??识别方法。偏最小二乘判别分析斤１＾＞０人）是＿种更为强调组间差异的模式识别??方法，可以筛选出与反应没有直接关系的变化，使得结果更可靠，更容易理解，判别??能力明显优于ＰＣＡ＿。??ＰＣＡ－Ｘ?＃ａ?ＰＣＡ－Ｘ?＃ａ?ＰＣＡ－Ｘ?＃ａ??■?Ｂ?■?Ｂ?■?Ｂ??▲?ＱＣ?Ｍ?ＶＣ?Ａ?Ｃ??１５〇〇：?■?＾?１５００：
【参考文献】：
期刊论文
[1]高脂血症相关疾病发病机制研究进展[J]. 李艳,孙珂焕,白芳,罗焕敏,吴正治. 辽宁中医药大学学报. 2019(04)
[2]多不饱和脂肪酸的来源及生理功能研究[J]. 靳革,李娟,齐悦,杨勇. 饲料博览. 2018(04)
[3]载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病肾病相关性的研究进展[J]. 郭佳,柯亭羽. 医学综述. 2018(08)
[4]老年冠心病急性发作期病人血清同型半胱氨酸与LPL基因多态性相关分析[J]. 黎才丽,黄勇,许政衡. 中西医结合心脑血管病杂志. 2017(21)
[5]过氧化物酶体增殖物激活受体γ对脏器损伤保护作用的研究进展[J]. 丁瑞文,何妹仪,李志鹏,王美容,柳垂亮. 医学综述. 2017(21)
[6]冠心病合并高脂血症患者血脂水平与主要炎症因子的相关性[J]. 沈正军. 心血管康复医学杂志. 2017(04)
[7]2型糖尿病伴高脂血症患者氧化应激反应与血脂代谢紊乱的关系研究[J]. 马尧,姜维娜,江红. 临床和实验医学杂志. 2017(11)
[8]益生菌干预对高脂高糖饮食诱导肥胖小鼠肠道菌群及脂代谢影响的研究[J]. 孙兆男,张卫东,杨云竣,尹宇振,张烨,郭艳杰,袁杰利. 中国微生态学杂志. 2017(02)
[9]高脂饮食喂养建立高脂血症模型的验证及规律探讨[J]. 王燕萍,彭丹虹,刘晓琪,谢蓉,李先涛. 中国比较医学杂志. 2017(01)
[10]载脂蛋白CⅢ的研究现状[J]. 靳景璐,李建军,郭远林. 中国动脉硬化杂志. 2016(10)
本文编号：3057887
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