Rb在人骨肉瘤增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制研究

发布时间：2021-05-18 06:00

　　目的:探讨视网膜母细胞瘤基因（Rb）对人骨肉瘤增殖、迁移和侵袭作用的影响,并从分子层面分析Rb分子对人骨肉瘤生物学性状的影响。方法:（1）检测Rb在正常成骨细胞（hFOB1.19）和骨肉瘤细胞系（U2-OS、Saos-2及MG-63）中RNA含量,同时检测Rb在正常骨组织和人骨肉瘤组织中表达量,比较其表达量差异。（2）选取Saos-2细胞,利用慢病毒构建Rb高表达和低表达模型,对照组转染空载体。检测高表达模型和低表达模型中Rb对骨肉瘤细胞增殖（CCK-8实验）、迁移（划痕实验）和侵袭（Transwell实验、qRT-PCR、Western-bolt）等生物学特性的影响。（3）慢病毒转染Saos-2骨肉瘤细胞后构建骨肉瘤裸鼠移植瘤动物模型,2周后开始测量和比较各组瘤体的体积和重量,qRT-PCR检测裸鼠瘤体内Rb和细胞绒毛蛋白基因（Ezrin）的表达量。结果:（1）qRT-PCR实验结果显示,Rb在人骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系中的表达量均较正常骨组织（P<0.001）和成骨细胞（P<0.001）中显著降低。（2）利用慢病毒载体来转染Saos-2骨肉瘤细胞,转染效率可达90%以上... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 Rb在骨肉瘤细胞系和骨肉瘤临床标本中的表达比较
    1 材料与方法
        1.1 组织样本和细胞系来源
        1.2 主要耗材仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 总RNA的提取
        1.5 总RNA逆转录成c DNA
        1.6 cDNA进行qRT-PCR
    2 结果
        2.1 Rb在骨肉瘤各细胞系中低表达
        2.2 Rb在骨肉瘤组织中低表达
    3 讨论
    4 结论
第二部分 Rb在体外对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭作用的影响
    1 材料与方法
        1.1 主要耗材仪器
        1.2 主要试剂
        1.3 细胞培养与慢病毒转染
        1.4 Rb、Ezrin基因的qPCR反应
        1.5 细胞增殖实验
        1.6 细胞迁移实验
        1.7 细胞侵袭实验
        1.8 Western-Blot凝胶电泳
    2 结果
        2.1 成功构建Rb低表达模型和Rb过表达模型
        2.2 Rb过表达可以抑制骨肉瘤细胞的增殖
        2.3 Rb过表达可以抑制骨肉瘤细胞的迁移
        2.4 Rb过表达可以抑制骨肉瘤细胞的侵袭
        2.5 Rb过表达可以抑制Ezrin的 mRNA表达
        2.6 Rb过表达可以抑制Ezrin的蛋白表达
    3 讨论
    4 结论
第三部分 Rb在体内对骨肉瘤增殖及转移的影响
    1 材料与方法
        1.1 主要耗材仪器
        1.2 主要试剂
        1.3 建立异种移植瘤模型
        1.4 qPCR检测瘤体内Rb、Ezrin的 mRNA含量
    2 结果
        2.1 Rb在体抑制裸鼠瘤体生长
        2.2 Rb过表达可以抑制Ezrin的 mRNA表达
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
个人简历



本文编号：3193252