栝楼抗肿瘤活性蛋白TKP对肝癌细胞增殖的影响及机制研究

发布时间：2021-05-25 18:26

　　肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是常见的高发恶性肿瘤。因此,迫切需要探索治疗肝癌的新型药物。植物已被用作抗癌药物资源,并且许多来自植物的抗癌药物已经被报道。栝楼（Trichosanthes kirilowii）是广泛分布于我国各地的一种草本植物。栝楼具有多种生物活性成分,例如萜类化合物,固醇,类黄酮,含氮化合物和木材脂蛋白。大量研究表明,这些化合物具有多种药理活性,包括抗心肌缺血,抗缺氧,抗血小板聚集,抗炎,抗氧化作用和细胞毒性等。TKP是从栝楼果实中提取出的一种低毒抗肿瘤活性蛋白,它是一种丝氨酸蛋白酶。研究表明,TKP有显著的抗大肠癌活性,并且TKP可以通过PI3K/AKT介导的线粒体途径诱导大肠癌细胞凋亡。但是TKP对肝癌的影响尚未有研究。本研究旨在研究TKP对肝癌细胞增殖的影响,并进一步阐明其分子机制。主要研究内容包括以下几方面:第一部分:TKP对肝癌细胞增殖和有氧糖酵解的影响。分别用浓度为0、2.5、5、10、20和40μg/mL的TKP处理肝癌细胞Bel-7402,HepG2和肝正常细胞HL770224 h,之后用MTT法检测肝癌细胞存活率。M... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 肝癌
    1.2 栝楼简介
        1.2.1 栝楼
        1.2.2 栝楼中的活性物质
        1.2.3 栝楼的抗肿瘤活性
        1.2.4 TKP与肿瘤
    1.3 有氧糖酵解
        1.3.1 有氧糖酵解简介
        1.3.2 有氧糖酵解与肝癌
    1.4 PKM2 概述
        1.4.1 PKM2
        1.4.2 调控PKM2 的因子
    1.5 本课题研究目的及意义
第二章 TKP抑制肝癌细胞增殖和有氧糖酵解
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株系
        2.1.2 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞复苏及冻存
        2.2.3 TKP的提取及纯化
        2.2.4 MTT法检测细胞存活
        2.2.5细胞克隆形成实验
        2.2.6 葡萄糖和乳酸检测
        2.2.7 总RNA提取
        2.2.8 荧光定量PCR
        2.2.9 统计学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 细胞存活
        2.3.2 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 细胞克隆形成
        2.3.3 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 细胞有氧糖酵解
        2.3.4 TKP抑制人肝癌Bel-7402和HepG2 细胞糖酵解过程中关键因子的表达
    2.4 讨论
第三章 TKP通过调节PKM2 抑制肝癌细胞有氧糖酵解
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞株系
        3.1.2 实验试剂及抗体
    3.2 实验方法
        3.2.1 肝癌细胞培养
        3.2.2 肝癌细胞冻存及复苏
        3.2.3 TKP的提取及纯化
        3.2.4 细胞内蛋白提取
        3.2.5 Western印迹
        3.2.6 丙酮酸激酶活性测定
        3.2.7 总RNA提取
        3.2.8 荧光定量PCR
        3.2.9 细胞转染
        3.2.10 葡萄糖和乳酸含量检测
        3.2.11 统计学分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 TKP抑制PKM2 的表达和核易位
        3.3.2 TKP抑制PKM2 丙酮酸激酶活性
        3.3.3 过表达PKM2 逆转TKP对肝癌细胞有氧糖酵解的抑制作用
    3.4 讨论
第四章 TKP通过β-catenin/c-Myc/hnRNPA1 途径调节PKM2、肝癌细胞增殖和有氧糖酵解
    4.1 实验材料
        4.1.1 细胞株系
        4.1.2 实验试剂及抗体
    4.2 实验方法
        4.2.1 肝癌细胞培养
        4.2.2 肝癌细胞复苏及冻存
        4.2.3 TKP的提取及纯化
        4.2.4 总RNA提取
        4.2.5 荧光定量PCR
        4.2.6 细胞蛋白提取
        4.2.7 Western印迹
        4.2.8 葡萄糖和乳酸含量检测
        4.2.9 MTT法检测细胞存活
        4.2.10 统计学分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 TKP抑制肝癌细胞中hnRNPA1和c-Myc的表达
        4.3.2 TKP通过β-catenin/c-Myc/hnRNPA1 途径调节PKM2
        4.3.3 TKP通过β-catenin/c-Myc/hnRNPA1 途径抑制肝癌细胞有氧糖酵解和细胞增殖
    4.4 讨论
结论
参考文献
附录1 主要试剂配方
附录2 实验主要仪器设备
附录3 英文缩略语表
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式


【参考文献】：
期刊论文
[1]Targeting Wnt/β-catenin pathway in hepatocellular carcinoma treatment[J]. Valery Vilchez,Lilia Turcios,Francesc Marti,Roberto Gedaly.  World Journal of Gastroenterology. 2016(02)
[2]Hepatocellular carcinoma: From diagnosis to treatment[J]. Abhijeet Waghray,Arvind R Murali,KV Narayanan Menon.  World Journal of Hepatology. 2015(08)



本文编号：3205805