吗啡促进乳腺癌细胞增殖及诱导阿霉素和紫杉醇抵抗的研究

发布时间：2017-04-21 16:12

  本文关键词：吗啡促进乳腺癌细胞增殖及诱导阿霉素和紫杉醇抵抗的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究吗啡对乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺上皮细胞系MCF-10A的增殖力的影响,研究吗啡对干性相关转录因子Oct4和C-myc的影响。探索吗啡与阿霉素和紫杉醇联合使用对乳腺癌细胞药物敏感性的影响。探索纳美芬能否抑制吗啡对肿瘤的作用。方法:1、以悬浮细胞无血清微球体培养(Sphere formation assay)技术检测吗啡对乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺上皮细胞系MCF-10A微球体形成能力的影响;细胞克隆形成实验(Colony formation assay)观察吗啡对乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺上皮细胞系MCF-10A增殖能力的影响;2、利用蛋白质免疫印迹(Western blot)和荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测吗啡对乳腺癌细胞中肿瘤干细胞相关转录因子Oct4,C-myc的表达变化;3、以噻唑蓝染色(MTT)实验、流式细胞术(Flow cytometry analysis)和Western blot实验检测吗啡与化疗药物阿霉素或紫杉醇联合使用后对细胞活力,凋亡以及凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3和cleaved PARP的变化;4、以悬浮细胞无血清微球体培养检测纳美芬抑制吗啡促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖能力。结果:1、吗啡增强乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺上皮细胞系MCF-10A的微球体形成能力;与对照组相比,经吗啡(1,10μM)作用后的MCF-7和MCF-10A细胞形成的微球体数量明显增加(P0.001),微球体体积显着增大(P0.001);2、细胞克隆形成实验结果显示,吗啡(1,10μM)作用于MCF-7和MCF10A细胞后,1μM吗啡处理后的MCF-7和MCF-10A的细胞克隆形成能力分别增加到20.14%±1.32%,18.06%±0.76%(P0.01),而10μM吗啡处理后,MCF-7和MCF-10A的细胞克隆形成能力分别增加到32.48%±0.85%,27.54%±0.76%(P0.001),显示吗啡增强MCF-7和MCF10A克隆形成能力;3、Real-time PCR实验结果显示,与对照组比较,吗啡处理后的MCF-7细胞,其Oct4和C-myc的m RNA转录水平明显增高,1μM和10μM吗啡组Oct4分别增加2.4±0.15(p0.01)、13.6±0.21(P0.001),C-myc增加4.3±0.13(P0.01)、15.7±0.16(P0.001),而Western blot实验结果同样显示,1μM和10μM吗啡作用于MCF-7细胞后,MCF-7细胞中的Oct4和C-myc蛋白表达水平明显增加;4、吗啡降低阿霉素和紫杉醇对MCF-7细胞的毒性作用。在0.5μM阿霉素或10 n M紫杉醇作用下,单独加入阿霉素或紫杉醇的为对照组,结果显示,阿霉素或紫杉醇与吗啡联合应用的实验组中MCF-7细胞的cleaved PARP、cleaved caspase-3表达量下降,吗啡降低阿霉素或紫杉醇诱导MCF-7细胞凋亡蛋白的表达变化;流式细胞术结果显示,吗啡(1μM、10μM)降低0.5μM阿霉素或10 n M紫杉醇作用下凋亡细胞的比例减少了19.73%±0.86%(P0.001),22.23%±0.50%(P0.001);7.43%±0.76%(P0.001),10.76%±0.56%(P0.01);5、纳美芬(10μM)抑制吗啡(10μM)促进MCF-7、MCF-10A的微球体形成能力(P0.001)。结论:阿片类镇痛药吗啡促进MCF-7和MCF-10A细胞成球能力以及克隆形成能力;吗啡增加肿瘤干细胞相关转录因子Oct4、C-myc在蛋白水平和转录水平表达量;吗啡增强MCF-7细胞对化疗药物紫杉醇和阿霉素的耐受性,导致MCF-7细胞对紫杉醇和阿霉素耐药;阿片类受体拮抗剂纳美芬一定程度上抑制吗啡所促进MCF-7、MCF-10A细胞的成球能力。综上所述,本研究揭示了吗啡对化学药物治疗效果的影响,为吗啡的临床应用提供了新的指导。
【关键词】：吗啡 化疗药物抵抗 阿霉素 紫杉醇 细胞增殖
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614;R737.9
【目录】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-21
• 1、材料14-16
• 1.1 细胞系14
• 1.2 实验药品、试剂14-16
• 2、方法16-21
• 2.1 细胞培养16
• 2.2 MTT细胞毒性测定16
• 2.3 细胞凋亡检测16-17
• 2.4 荧光定量PCR实验17-18
• 2.5 微球体形成试验18-19
• 2.6 细胞克隆成形实验19
• 2.7 蛋白质免疫印迹实验19-20
• 2.8 统计学分析方法20-21
• 结果21-28
• 1 吗啡增强乳腺癌细胞MCF-7、MCF-10A的增殖能力21-23
• 2 吗啡诱导MCF-7 细胞对阿霉素和紫杉醇的耐药23-26
• 3 纳美芬（Nalmefene）逆转吗啡促进乳腺癌细胞的微球体形成能力26-28
• 讨论28-30
• 结论30-31
• 参考文献31-35
• 综述35-44
• 参考文献39-44
• 病例报告44-48
• 参考文献47-48
• 攻读学位期间发表文章情况48-49
• 致谢49-50

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本文编号：320707