胚胎干细胞向内皮（祖）细胞分化与组织来源内皮细胞的比较
发布时间：2021-06-12 03:58
血管内皮细胞受损与许多心脑血管疾病的发生和发展有关,已成为在当今生命科学、药学领域中重要的研究对象。心血管疾病（Cardiovascular disease,CVD）是世界上导致死亡的主要原因之一,通常由内皮功能障碍引发;缺乏足够数量功能正常的内皮细胞（Endothelial cells,ECs）是阻碍了通过细胞替代治疗心血管疾病的原因之一。人类多能干细胞包括胚胎干细胞（Human embryonic stem cells,hESCs）和诱导多能干细胞（Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs）可提供体外生产大量功能内皮细胞的机会,可用于移植,药物筛选或研究。然而,目前hESCs衍生ECs的分化方案多种多样,对其分化后内皮细胞类型特性的研究尚不完善,尤其是不同的分化方法以及基础培养液对于胚胎干细胞向内皮细胞分化的影响以及分化后细胞特性的区别尚未充分研究。为此本研究首先通过分离组织来源的人脐带和脐血的内皮细胞和内皮祖细胞,建立培养鉴定体系,然后通过建立多能干细胞分化为内皮细胞或内皮祖细胞的分化方案,对比不同基础分化培养液和及不同分化方法探究不...
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HUAEC和HUVEC的细胞增殖活力
胚胎干细胞向内皮（祖）细胞分化与组织来源内皮细胞的比较82.3实验结果2.3.1HUAEC和HUVEC的细胞形态和增殖活力倒置显微镜下观察HUAEC和HUVEC的形态特征，发现经Ⅱ型胶原酶消化法分离的原代细胞，2-3天内皮细胞就可以贴壁，随后细胞膜扩张，细胞增殖速度加快，单个细胞形态发生改变，由原来的圆形变得不规则，呈多边形或纺锤形，聚集的细胞增殖向四周扩展形成中心部位排列密集，周围游离生长的的细胞集落，呈漩涡状或纹理状（图2.1）在培养瓶底部均匀分布。传代培养后内皮细胞的活力明显变强，增殖速度加快，传至10代以后内皮细胞形态有所变化，增殖速度明显减慢（图2.2）。原代分离的人脐动脉内皮细胞与静脉内皮细胞形态并无明显区别；刚分离的细胞活力旺盛，经过传代后活力明显下降，HUAEC的增殖活力略高于HUVEC（P<0.05）。图2.1HUAEC和HUVEC的P1、P3、P5、P7、P9代细胞形态。Figure.1HUAECandHUVECP1,P3,P5,P7,P9cellmorphology.图2.2HUAEC和HUVEC的细胞增殖活力。
胚胎干细胞向内皮（祖）细胞分化与组织来源内皮细胞的比较10后降低的趋势，基本不表达CD309，但大体上两者不具有差异（图2.4）图2.4流式细胞术分析HUAEC和HUVEC表面标记的表达。Figure2.4AnalysisofHUAECandHUVECSurfaceMarkersbyFlowCytometry..2.3.4HUAEC和HUVEC的特异基因表达通过qPCR检测两者的特异性基因的表达发现，HUVEC（P2）高表达静脉内皮细胞特异性基因COUP-TFⅡ和EPHB4；HUAEC（P2）高表达动脉特异性基因EFNB2、CXCR4、DLL4和NRP1（图2.5）。但是，HUAEC和HUVEC在相同的体外培养条件下，经过传代培养，从P2到P10，HUVEC的特异性基因COUP-TFⅡ和EPHB4相对表达量一直远高于HUAEC，保持其显著性差异；而HUAEC的特异性基因CXCR4、DLL4、NRP1和EFNB2的相对表达量显著下调，丧失其动脉特异性差异（P6代）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]New categorization of human vascular endothelial cells by pro-vs anti-proliferative phenotypes[J]. Miwako Nishio,Masako Nakahara,Chikako Sato,Koichi Saeki,Hidenori Akutsu,Akihiro Umezawa,Kazuyuki Tobe,Kazuki Yasuda,Akira Yuo,Kumiko Saeki. World Journal of Translational Medicine. 2015(03)
[2]一种高效分离和培养人脐动脉内皮细胞方法的建立[J]. 霍迎庆,王雷,贺淑君,韩晓帆,蒋蓓蓓,罗金才. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(07)
本文编号：3225907
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HUAEC和HUVEC的细胞增殖活力
胚胎干细胞向内皮（祖）细胞分化与组织来源内皮细胞的比较82.3实验结果2.3.1HUAEC和HUVEC的细胞形态和增殖活力倒置显微镜下观察HUAEC和HUVEC的形态特征，发现经Ⅱ型胶原酶消化法分离的原代细胞，2-3天内皮细胞就可以贴壁，随后细胞膜扩张，细胞增殖速度加快，单个细胞形态发生改变，由原来的圆形变得不规则，呈多边形或纺锤形，聚集的细胞增殖向四周扩展形成中心部位排列密集，周围游离生长的的细胞集落，呈漩涡状或纹理状（图2.1）在培养瓶底部均匀分布。传代培养后内皮细胞的活力明显变强，增殖速度加快，传至10代以后内皮细胞形态有所变化，增殖速度明显减慢（图2.2）。原代分离的人脐动脉内皮细胞与静脉内皮细胞形态并无明显区别；刚分离的细胞活力旺盛，经过传代后活力明显下降，HUAEC的增殖活力略高于HUVEC（P<0.05）。图2.1HUAEC和HUVEC的P1、P3、P5、P7、P9代细胞形态。Figure.1HUAECandHUVECP1,P3,P5,P7,P9cellmorphology.图2.2HUAEC和HUVEC的细胞增殖活力。
胚胎干细胞向内皮（祖）细胞分化与组织来源内皮细胞的比较10后降低的趋势，基本不表达CD309，但大体上两者不具有差异（图2.4）图2.4流式细胞术分析HUAEC和HUVEC表面标记的表达。Figure2.4AnalysisofHUAECandHUVECSurfaceMarkersbyFlowCytometry..2.3.4HUAEC和HUVEC的特异基因表达通过qPCR检测两者的特异性基因的表达发现，HUVEC（P2）高表达静脉内皮细胞特异性基因COUP-TFⅡ和EPHB4；HUAEC（P2）高表达动脉特异性基因EFNB2、CXCR4、DLL4和NRP1（图2.5）。但是，HUAEC和HUVEC在相同的体外培养条件下，经过传代培养，从P2到P10，HUVEC的特异性基因COUP-TFⅡ和EPHB4相对表达量一直远高于HUAEC，保持其显著性差异；而HUAEC的特异性基因CXCR4、DLL4、NRP1和EFNB2的相对表达量显著下调，丧失其动脉特异性差异（P6代）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]New categorization of human vascular endothelial cells by pro-vs anti-proliferative phenotypes[J]. Miwako Nishio,Masako Nakahara,Chikako Sato,Koichi Saeki,Hidenori Akutsu,Akihiro Umezawa,Kazuyuki Tobe,Kazuki Yasuda,Akira Yuo,Kumiko Saeki. World Journal of Translational Medicine. 2015(03)
[2]一种高效分离和培养人脐动脉内皮细胞方法的建立[J]. 霍迎庆,王雷,贺淑君,韩晓帆,蒋蓓蓓,罗金才. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(07)
本文编号：3225907
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