TGF-β1/smad3在肝星状细胞中对IL-1R1及IL-1β表达的影响
发布时间：2021-06-18 17:25
目的研究HSC中TGF-β1通过smad3对IL-1R1及IL-1β的影响。方法构建转化生长因子TGF-β1的短发卡RNA（shRNA）及阴性对照质粒组装入慢病毒载体,分别转染至大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞,筛选出稳定干扰细胞株,并分别命名为TGF-β1-KD组和Ctrl-KD组。用细胞因子TGF-β1 12ng/ml刺激HSC细胞和TGF-β1-KD细胞,即实验分为五组:A:HSC组、B:HSC+TGF-β1组、C:Ctrl-KD组、D:TGF-β1-KD组、E:TGF-β1-KD+TGF-β1组。细胞培养48h后,提取各组总RNA、总蛋白采用q-PCR、Western-blot检测IL-1R1、IL-1β、α-SMA的表达情况。为了探讨smad3在其中的作用,在B组的基础上使用smad3抑制剂（SIS3）提前2h处理HSC,采用Western-blot检测IL-1R1和IL-1β的变化。为了进一步探讨IL-1β对HSC的活化是否依赖TGF-β1,我们用12ng/ml的TGF-β1和IL-1β细胞因子分别处理A组和D组细胞,采用Western-blot检测α-SMA和Col-Ⅰ的...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
构建干扰的TGF-β1病毒载体Fig1.Thelentiviralvector
重庆医科大学硕士研究生学位论文23TGF-β1-KD组中TGF-β1的mRNA水平(0.110±0.018)较Ctrl-KD组(1.158±0.170)明显降低（p<0.001），且差异具有统计学意义。另外，提取三组细胞总蛋白，Western-blot检测TGF-β1蛋白表达情况（图1c），结果提示：TGF-β1-KD组中TGF-β1的蛋白表达（0.417±0.042）较Ctrl-KD组（2.102±0.016）和HSC组（2.417±0.136）明显降低（P<0.001），差异具有统计学意义。这说明HSC中的TGF-β1的表达被成功干扰。图2慢病毒对TGF-β1的干扰Fig2.GenesilencingofTGF-β1byshRNA.n=3，***P<0.001,ascomparedtotheCtrl-KDgroup.4.2TGF-β1下调HSC中IL-1R1的表达4.2.1q-PCR检测TGF-β1对IL-1R1的表达的影响以相同的细胞浓度培养HSC组、Ctrl-KD组、TGF-β1-KD组细胞于T25培养瓶中，细胞贴壁后用12ng/ml的人重组细胞因子TGF-β1刺激HSC组、TGF-β1-KD
重庆医科大学硕士研究生学位论文25图4TGF-β1对IL-1R1蛋白表达的影响Fig4.EffectofTGF-β1ontheexpressionofIL-1R1protein（n=3，**=P<0.01，***=P<0.001）4.3TGF-β1通过smad3调节IL-1R1的表达TGF-β/smads信号通路是TGF-β1传导的重要信号通路，smad3在此通路中扮演着重要作用。在胰腺星状细胞中，TGF-β1对IL-1R1的抑制作用已广为研究，因此在肝星状细胞中我们使用smad3抑制剂（SIS3）抑制smad3的磷酸化，观察TGF-β1对IL-1R1的作用。如图5中显示加TGF-β1刺激48h后IL-1R1的表达量（0.654±0.142）较未处理组（1.442±0.376）下降（P<0.05），提前用抑制剂SIS3处理2小时再加TGF-β1刺激后IL-1R1的表达量（1.645±0.226）较TGF-β1处理组（0.654±0.142）增加（P<0.05），差异具有统计学意义。由于IL-1R1主要配体是IL-1β蛋白，因此我们还检测了IL-1β的变化（图5），结果提示：抑制剂SIS3和TGF-β1共同处理后IL-1β的表达量（0.456±0.179）较TGF-β1单独处理组（0.082±0.013）增加（P<0.05），差异具有统计学意义。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Hepatic fibrosis:It is time to go with hepatic stellate cell-specific therapeutic targets[J]. Devaraj Ezhilarasan,Etienne Sokal,Mustapha Najimi. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2018(03)
[2]Role of inflammatory response in liver diseases: Therapeutic strategies[J]. José A Del Campo,Paloma Gallego,Lourdes Grande. World Journal of Hepatology. 2018(01)
[3]Liver fibrosis and hepatic stellate cells: Etiology, pathological hallmarks and therapeutic targets[J]. Chong-Yang Zhang,Wei-Gang Yuan,Pei He,Jia-Hui Lei,Chun-Xu Wang. World Journal of Gastroenterology. 2016(48)
本文编号：3237081
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
构建干扰的TGF-β1病毒载体Fig1.Thelentiviralvector
重庆医科大学硕士研究生学位论文23TGF-β1-KD组中TGF-β1的mRNA水平(0.110±0.018)较Ctrl-KD组(1.158±0.170)明显降低（p<0.001），且差异具有统计学意义。另外，提取三组细胞总蛋白，Western-blot检测TGF-β1蛋白表达情况（图1c），结果提示：TGF-β1-KD组中TGF-β1的蛋白表达（0.417±0.042）较Ctrl-KD组（2.102±0.016）和HSC组（2.417±0.136）明显降低（P<0.001），差异具有统计学意义。这说明HSC中的TGF-β1的表达被成功干扰。图2慢病毒对TGF-β1的干扰Fig2.GenesilencingofTGF-β1byshRNA.n=3，***P<0.001,ascomparedtotheCtrl-KDgroup.4.2TGF-β1下调HSC中IL-1R1的表达4.2.1q-PCR检测TGF-β1对IL-1R1的表达的影响以相同的细胞浓度培养HSC组、Ctrl-KD组、TGF-β1-KD组细胞于T25培养瓶中，细胞贴壁后用12ng/ml的人重组细胞因子TGF-β1刺激HSC组、TGF-β1-KD
重庆医科大学硕士研究生学位论文25图4TGF-β1对IL-1R1蛋白表达的影响Fig4.EffectofTGF-β1ontheexpressionofIL-1R1protein（n=3，**=P<0.01，***=P<0.001）4.3TGF-β1通过smad3调节IL-1R1的表达TGF-β/smads信号通路是TGF-β1传导的重要信号通路，smad3在此通路中扮演着重要作用。在胰腺星状细胞中，TGF-β1对IL-1R1的抑制作用已广为研究，因此在肝星状细胞中我们使用smad3抑制剂（SIS3）抑制smad3的磷酸化，观察TGF-β1对IL-1R1的作用。如图5中显示加TGF-β1刺激48h后IL-1R1的表达量（0.654±0.142）较未处理组（1.442±0.376）下降（P<0.05），提前用抑制剂SIS3处理2小时再加TGF-β1刺激后IL-1R1的表达量（1.645±0.226）较TGF-β1处理组（0.654±0.142）增加（P<0.05），差异具有统计学意义。由于IL-1R1主要配体是IL-1β蛋白，因此我们还检测了IL-1β的变化（图5），结果提示：抑制剂SIS3和TGF-β1共同处理后IL-1β的表达量（0.456±0.179）较TGF-β1单独处理组（0.082±0.013）增加（P<0.05），差异具有统计学意义。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Hepatic fibrosis:It is time to go with hepatic stellate cell-specific therapeutic targets[J]. Devaraj Ezhilarasan,Etienne Sokal,Mustapha Najimi. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2018(03)
[2]Role of inflammatory response in liver diseases: Therapeutic strategies[J]. José A Del Campo,Paloma Gallego,Lourdes Grande. World Journal of Hepatology. 2018(01)
[3]Liver fibrosis and hepatic stellate cells: Etiology, pathological hallmarks and therapeutic targets[J]. Chong-Yang Zhang,Wei-Gang Yuan,Pei He,Jia-Hui Lei,Chun-Xu Wang. World Journal of Gastroenterology. 2016(48)
本文编号：3237081
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