THAP8基因的表达调控及其对肺癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2021-06-28 20:17

　　研究背景:THAP（Thanatos-Associated protein）蛋白家族,因其N端共有一个在进化上高度保守的THAP锌指结构域而得名。许多THAP蛋白家族成员作为转录因子发挥作用,参与细胞的增殖、凋亡、血管生成等过程。THAP8是THAP家族的一个新成员,其表达和功能尚不清楚。本文主要研究THAP8基因的表达、调控及其功能。研究方法:通过TCGA数据库和Oncomine数据库的分析,发现THAP8在癌组织中的表达高于正常组织,然后利用荧光定量PCR分析了22对肺癌和癌旁组织中的THAP8的表达。利用Western blotting检测分析THAP8蛋白在人类正常肺细胞系Beas-2B和几种肺癌细胞系中的THAP8蛋白表达水平。利用过JASPAR软件分析,发现THAP8基因启动子区含有4个缺氧反应元件（HRE）,然后利用荧光素酶实验和Co Cl2诱导缺氧实验,分析缺氧诱导因子α（HIF1α）对THAP表达的调控作用。利用慢病毒系统干扰THAP8基因的表达,采用MTT细胞增殖实验、划痕实验、克隆形成实验、侵袭实验等分析了THAP8基因沉默对肺癌细胞生物学行为的影响。研究结果:1... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

人THAP蛋白家族成员结构模式图

硕士学位论文22图3-1THAP8在肺癌组织中的表达高于正常肺组织（A、B）利用TCGA数据库（A）及Oncomine数据库(B)分析了在肺癌组织和正常组织中THAP8基因的表达差异；（C）取22对临床样本分析，荧光定量PCR数据显示THAP8基因mRNA水平表达在肺癌组织和癌旁组织中存在明显的差异性，用GraphPad软件分析并计算具有显著性差异,N:正常组织，C:癌组织；（D）采用β-actin作为内参蛋白，重复三次用蛋白质印记技术检测了各肺细胞系中（95-D、Beas-2B、A549、H358、H446、H1437和H460）THAP8在蛋白水平表达的差异;（E）用GraphPad软件分析三次蛋白质印记实验结果，做灰度统计分析。

硕士学位论文24图3-2HIF1α调控THAP8基因的表达（A）表示THAP8基因启动子的部分序列，下划线标示的即是HRE位点；(B)HIF1α对THAP8转录水平的调控，在Hek293细胞转染质粒，24小时后进行荧光素酶检测分析；（C）用CoCl2诱导Beas-2B细胞缺氧，从而诱导HIF1α的表达，WB检测THAP8的蛋白表达变化，用β-actin作为内参蛋白。3.3干扰THAP8对肺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响3.3.1干扰THAP8细胞系的构建为了更进一步研究THAP8在肺癌中生物学的功能，我们首先构建了THAP8shRNA的表达载体，并包装成慢病毒颗粒。共设计了四个靶位点（THAP8基因干扰位点如表3-1所示），首先在95-D细胞中检验干扰效果，由于购买的THAP8干扰慢病毒带有红色荧光标记，因此可在感染72小时后在荧光显微镜观察感染效率的高低，从而采用适当的嘌呤霉素浓度培养筛选阳性细胞，最终获得THAP8低表达的稳定细株，经过反复的检测与分析，最终发现HSH004706-32-LVRH1MP和HSH004706-33-LVRH1MP这两个慢病毒的干扰效果最佳（图3-3A），因此在后文中采用这两个慢病毒对THAP8进行干扰（分别命名为sh-1和sh-2）。在分析了各种肺癌细胞系中THAP8基因的表达情况后，我们选取了THAP8

【参考文献】：
期刊论文
[1]HIF1α和Beclin1在成年牦牛脑组织中的表达与分布[J]. 拜占春,崔燕,余四九,马俊兴,何俊峰,张倩.  农业生物技术学报. 2019(10)
[2]Hypoxia inducible factor（HIF） in the tumor microenvironment:friend or foe?[J]. Yanqing Huang,Daniel Lin,Cullen M.Taniguchi.  Science China（Life Sciences）. 2017(10)



本文编号：3254984