Srxn1在血管性认知功能障碍大鼠模型发病过程中的变化

发布时间：2021-07-20 00:04

　　目的运用动物模型为研究对象,使用Western blot、ELISA、rt-PCR等技术,测定血管性认知功能障碍大鼠脑脊液中Srxn 1含量、大鼠脑海马组织Srxn 1的蛋白质表达水平的变化情况,探讨Sulfiredoxin-1（Srxn1）与认知功能障碍严重程度的相关性。方法1、模型制作:普通级健康雄性SD大鼠66只,周龄6w,体质量230²70g,大鼠分笼适应性喂养5d,正常光照,自由饮水和摄食,温度22℃,相对湿度50%⁷0%。将大鼠分为随机的五组,分别用字母A、B、C、D、E代号表示;A组为空白对照组,选有6只SD大鼠,该组大鼠不予以任何处理;B组为假手术组,选有6只SD大鼠,该组大鼠的处理方式为仅分离双侧颈总动脉;C组为常规手术组,选有18只SD大鼠,对该组老鼠运用改良2-V0法结扎双侧颈总动脉,从而建立VCI大鼠模型;D组为Srxn1-si RNA手术组,选有18只SD大鼠,该组大鼠同样采用改良2-V0法结扎双侧颈总动脉,不过在结扎双侧颈总动脉前24h,将Srxn1基因干扰片段注射于大鼠的侧脑室;E组为Nrf2-si RNA手术组... 

【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

颈动脉分离结扎

硕士学位论文8Nrf2-1754反义链:5’AGUAAGGUUUCCCAUCCUCTT3’（注意事项：1、各手术组大鼠在进行模型制备前需禁食12h及禁水4h；2、麻醉剂10%水合氯醛的配比：大鼠体重（kg）：水合氯醛（mg）=1：400，注射方式：腹腔注射；3、伤口经缝合后，需充分消毒以及红霉素软膏涂抹预防感染，时刻注意无菌原则，密切观察大鼠生命体征；4、手术结束后，待大鼠状态稳定后，方可送至笼中继续饲养及观察；5、整个实验过程中，各组大鼠所饲养的环境以及喂养食物均保持一致。）图2-1颈动脉分离结扎图2-2侧脑室注射1.2.2筛选：造模30天后采用Morris水迷宫评价大鼠的空间学习记忆能力，从而筛选出造模成功的目标VD模型。1.2.3标本的提取及制作：脑脊液和组织蛋白提取：各组大鼠用过量水合氯醛麻醉，断头取脑。于冰上迅速剥开颅骨，收取脑脊液于干净的EP管内并做好标记，同时迅速分离出脑海马组织，在预冷的生理盐水中漂洗后，装于干净的EP管中并做好标记，将脑海马组织及脑脊液放入-80℃冰箱中保存待用。（如图2-3、图2-4）

Srxn1在血管性认知功能障碍大鼠模型发病过程中的变化及相关性研究9图2-3大鼠脑脊液收集图2-4脑海马组织分离1.3实验方法1.3.1Westernblot检测Srxn1、Nrf2蛋白表达水平1、组织蛋白液的提取：将各组大鼠的脑海马组织称重后，用剪刀适当剪碎，放置一干燥的新2.5mlEP管中，加入研磨钢珠及组织蛋白裂解液（按照每100mg大鼠脑海马组织中加入1ml组织蛋白裂解液的比例加入适当裂解液），放置于冷冻组织研磨仪中研磨大鼠脑海马组织，然后将裂解后的大鼠脑海马组织裂解研磨液放置在4℃冰箱中静置20min以上，接着放置于离心机中，按4℃，12000rpm离心lOmin，小心吸取上清液移至另一洁净新1.5mlEP管中，此为提取得到的蛋白组织粗提取液；2、组织蛋白浓度测定：利用紫外分光光度计测定各组大鼠脑海马组织蛋白粗提取液中浓度，按组做好标记后，加入蛋白上样缓冲液（大鼠脑海马组织蛋白液：蛋白上样缓冲液比例为4:1），放置沸水中开盖煮10min使其变性，待其冷却至室温后，可放置-80℃冰箱中保存；3、SDS-PAGE电泳：进行WB实验前将组织蛋白提取液于室温中放置30min左右；⑴清洗玻璃板：一只手扣紧玻璃板，另一只手拿抹布蘸点洗洁精轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲干净，最后用蒸馏水再次冲洗一遍后立在筐里晾干。


本文编号：3291705