法尼醇X受体在齐墩果酸诱导的小鼠胆汁淤积型肝损伤中的作用

发布时间：2021-08-01 09:57

　　目的:探讨法尼醇X受体（farnesoid X receptor,FXR）在齐墩果酸诱导的小鼠胆汁淤积型肝损伤中的作用。方法:将雄性野生型小鼠（wild type,WT）和雄性FXR敲除小鼠（FXR-/-）随机分为空白组（玉米油,C）,齐墩果酸低剂量组（457 mg/kg,L）和齐墩果酸高剂量组（685.5 mg/kg,H）。每天定时灌胃一次。分别在齐墩果酸单次给药3 h后以及齐墩果酸连续给药4天,末次给药3 h和末次给药24 h后取材。采用生化试剂盒检测血清生化指标;HE染色观察肝组织形态变化;采用UPLC-MS技术分析肝组织、血清及胆汁中胆汁酸组分变化;RT-PCR检测胆汁酸相关基因表达以及采用Western blot法检测BSEP膜蛋白表达。结果:1.齐墩果酸连续给药4天,末次给药24 h:WT小鼠中,与空白组比,齐墩果酸高剂量组ALT、AST、ALP及TBA水平升高,病理见肝细胞大面积坏死。FXR-/-小鼠中,与空白组比,齐墩果酸高剂量组ALT、AST和ALP水平升高,病理见肝细胞肿胀。与WT小鼠齐墩果酸高剂量组比较,FXR-/-小鼠齐墩果酸高剂量组ALT、AST、ALP及TB... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

胆汁酸肠肝循环及FXR调节示意图

遵义医科大学硕士学位论文冯红182结果2.1FXR-/-小鼠基因鉴定结果利用琼脂糖凝胶电泳鉴定子代小鼠基因型。根据Marker示：WT小鼠为200bp，FXR-/-小鼠为250bp，以及与WT小鼠和已鉴定过的FXR-/-小鼠进行对照。由图2可知，子代小鼠鉴定均为纯合子，可用于后续试验。图2.FXR-/-小鼠基因鉴定。Marker显示WT为200bp，FXR-/-小鼠为250bp。泳道1：FXR-/-小鼠对照；泳道2：WT小鼠对照；泳道3-13：子代小鼠鼠尾DNA.Fig.2.PCRgenotypingofFXR-/-mice.MarkershowedWTmice200bp,FXR-/-mice250bp.Lane1:FXR-/-mice;Lane2:WTmice;Lanes3-13:offspringmiceDNAsamples.2.2WT小鼠和FXR-/-小鼠对齐墩果酸诱导的胆汁淤积型肝损伤的敏感性分析2.2.1齐墩果酸连续给药4天，末次给药24h对WT小鼠和FXR-/-小鼠体重及肝脏指数的影响实验期间，WT小鼠齐墩果酸高剂量组活动逐渐减少，反应迟钝，其余各组小鼠无特殊。如图3：WT小鼠中，与空白组比较，齐墩果酸高剂量组小鼠体重降低，肝脏肿大，肝脏指数增加（P<0.05），提示小鼠肝脏损伤。胆囊增大且重量增加（P<0.05），胆汁呈墨绿色，提示可能存在胆汁淤积[28]；FXR-/-小鼠中，与空白组相比，齐墩果酸高剂量组肝脏指数增加（P<0.05），体重及胆囊重量无明显变化（P>0.05）；与WT小鼠齐墩果酸高剂量组相比，FXR-/-小鼠齐墩果酸高剂量组胆囊缩小，胆囊重量降低（P<0.05），提示FXR-/-小鼠胆汁淤积程度轻。

遵义医科大学硕士学位论文冯红19图3.齐墩果酸连续给药4天，末次给药24h后小鼠体重与肝脏指数的变化。（C：空白组；L：齐墩果酸低剂量组；H：齐墩果酸高剂量组；±SEM，n=8；与空白组比较，*P<0.05；与WT小鼠比较，#P<0.05）。Fig.3.Changesinmouseweightandliverindexafteroleanolicacidcontinuousadministrationfor4days,and24hoursafterthelastdose.(C:controlgroup;L:oleanolicacidlowdosegroup;H:oleanolicacidhighdosegroup;±SEM,n=8;*P<0.05vs.controlgroup;#P<0.05vs.WTmice).2.2.2齐墩果酸连续给药4天，末次给药24h对WT小鼠和FXR-/-小鼠血清生化的影响血清ALT、AST、ALP及TBA均是反应胆汁淤积型肝损伤的常见指标，ALP>2倍正常上限（ULN）为胆汁淤积型肝损伤的临床诊断标准之一。如图4：WT小鼠中，与空白组比较，给药后血清ALT、AST、ALP及TBA水平均增加，其中齐墩果酸高剂量组增加更显著（P<0.05），且ALP为2.37倍ULN，表明齐墩果酸高剂量组小鼠产生了胆汁淤积型肝损伤，齐墩果酸诱导小鼠胆汁淤积型肝损伤模型成功[29]；FXR-/-小鼠中，与空白组相比，齐墩果酸高剂量组ALT、AST与ALP水平明显升高（P<0.05），ALP为1.45倍ULN；与WT小鼠齐墩果酸高剂量组比较，FXR-/-小鼠齐墩果酸高剂量组ALT、AST、ALP及TBA水平降低（P<0.05）。结果提示高剂量齐墩果酸未诱导FXR-/-小鼠胆汁淤积型肝损伤。

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本文编号：3315315