NDUFA4在人结直肠癌细胞生长中的作用及机制研究
发布时间：2021-08-01 14:42
目的:观察改变NDUFA4表达对人结直肠癌（colorectal carcimona,CRC）细胞生长的影响;探讨NDUFA4对人CRC细胞生长影响可能的分子机制;检测NDUFA4在人CRC临床组织中的表达并分析其临床意义。方法:1.利用Real time PCR和Western Blot检测不同人结直肠癌细胞株中NDUFA4的表达情况;免疫荧光法验证人结直肠癌细胞株SW620细胞和SW480细胞中NDUFA4的表达;设置p-NDUFA4组、p-Cont组和sh-NDUFA4组、sh-NC组,利用Lipofectamine 3000转染试剂,将前期构建的NDUFA4过表达质粒（p-NDUFA4）、对照质粒（p-Cont）和NDUFA4干扰质粒（p-shNDUFA4）、对照质粒（p-shCont）分别体外瞬时转染人CRC直肠癌SW620细胞和SW480细胞;Real time PCR和Western Blot检测转染后各组细胞中NDUFA4的表达情况;CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖活性和克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期的变化;Western Blot检测细胞周期相关蛋白及...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人结直肠癌细胞株中NDUFA4的表达Fig.1-1TheexpressionofNDUFA4indifferenthumanCRCcellswasdetectedbyRealtime
遵义医科大学硕士学位论文刘士明30细胞表达更高水平的NDUFA4（图1-2，P<0.05），与我们前面实验结果一致。基于NDUFA4在人结直肠癌细胞株中的表达差异，在后续研究中，我们分别在SW620细胞中过表达NDUFA4和在SW480细胞中下调NDUFA4表达，观察改变NDUFA4表达是否影响人CRC细胞的生长。图1-2NDUFA4在人结直肠癌细胞中的表达Fig.1-2TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCcells.ImmunofluorescencestainingwasusedtodetecttheexpressionofNDUFA4proteininhumanCRCcelllineSW620andSW480cells.Magnificance:60×.Therelativequantitivewascalculated.*P<0.05.3.1.3NDUFA4在人CRC直肠癌SW620细胞和SW480细胞中的表达为了观察改变NDUFA4表达对SW620和SW480细胞生长的影响，我们首先通过RealtimePCR和WesternBlot技术分别检测各组细胞中NDUFA4的表达。结果发现：在SW620细胞中，与p-Cont对照组相比，p-NDUFA4过表达组中NDUFA4的表达水平明显上调（图1-3A-C，P<0.05），而在SW480细胞中，sh-NDUFA4组中NDUFA4的表达水平明显低于sh-NC组，且差异具有统计学意义（图1-3D-F，P<0.05）。
遵义医科大学硕士学位论文刘士明31图1-3NDUFA4在人结直肠癌SW620和SW480细胞中的表达情况Fig.1-3TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCSW620andSW480cells.HumanCRCSW620andSW480cellswereinstantaneouslytransfectedwithp-NDUFA4,p-Cont,sh-NDUFA4,orsh-NC,respectively.ThemRNAandproteinexpressionofNDUFA4weredeterminedbyRealtimePCR(A)(D)andWesternBlot(B)(E)andcalculated(C)(F).*P<0.05,**P<0.01.3.1.4NDUFA4对SW620和SW480细胞增殖和克隆形成能力的影响为了观察改变NDUFA4表达对结直肠癌细胞SW620和SW480细胞生长的影响，我们选用CCK-8法检测细胞的增殖活性，克隆形成实验检测了细胞的克隆形成能力。结果发现：在SW620细胞中，p-NDUFA4过表达组细胞的增殖能力和克隆形成能力较p-Cont对照组明显增加（图1-4A-C，P<0.05）；而在SW480细胞中，与sh-NC对照组相比，sh-NDUFA4下调组细胞的增殖能力和克隆形成能力明显降低（图1-4D-F，P<0.05），上述结果可说明NDUFA4基因的过表达可以有效促进SW620细胞的体外生长，而NDUFA4基因的下调能够有效抑制SW480细胞体外生长。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Notch1、Akt、PTEN及ABCG2在直肠癌干细胞中的表达研究[J]. 曲泽,姜东,侯明星. 内蒙古医科大学学报. 2020(01)
[2]下调NDUFA4对人结直肠癌SW480细胞体外生长的影响[J]. 刘士明,丁涛,雷良玉,胡琳,冒灵,陈超,郭萌萌,徐林. 遵义医学院学报. 2019(04)
[3]Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化的作用[J]. 刘士明,丁涛,雷良玉,胡琳,冒灵,陈超,郭萌萌,徐林. 医学研究生学报. 2019(06)
[4]NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞体外生长的影响[J]. 刘士明,丁涛,雷良玉,胡琳,冒灵,陈超,郭萌萌,徐林. 肿瘤防治研究. 2019(05)
[5]神经系统线粒体病[J]. 袁云. 中华神经科杂志. 2019 (04)
[6]细胞死亡调节因子GRIM-19在肿瘤及非肿瘤疾病中的作用[J]. 刘岩,汲坤. 沈阳医学院学报. 2018(03)
[7]Emergency resection surgery for colorectal cancer: Patterns of recurrent disease and survival[J]. Joe Littlechild,Muneer Junejo,Anne-Marie Simons,Finlay Curran,Darren Subar. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2018(01)
[8]Colorectal cancer,screening and primary care: A mini literature review[J]. Athanasios Hadjipetrou,Dimitrios Anyfantakis,Christos G Galanakis,Miltiades Kastanakis,Serafim Kastanakis. World Journal of Gastroenterology. 2017(33)
[9]Colorectal cancer population screening programs worldwide in 2016: An update[J]. Mercedes Navarro,Andrea Nicolas,Angel Ferrandez,Angel Lanas. World Journal of Gastroenterology. 2017(20)
[10]富含亮氨酸蛋白LRP130抗体在恶性肿瘤中的表达和临床意义[J]. 胡云峰,崔洁,雷侠,张鸿毅. 陕西医学杂志. 2017(05)
硕士论文
[1]MRPL49、NDUFA3在卵巢癌组织中的蛋白表达及意义的研究[D]. 刘涛.中国医科大学 2018
[2]共表达siRNA-Stat3与GRIM-19质粒对甲状腺癌细胞的抑制效应及机理探讨[D]. 任仲喜.吉林大学 2012
本文编号：3315715
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人结直肠癌细胞株中NDUFA4的表达Fig.1-1TheexpressionofNDUFA4indifferenthumanCRCcellswasdetectedbyRealtime
遵义医科大学硕士学位论文刘士明30细胞表达更高水平的NDUFA4（图1-2，P<0.05），与我们前面实验结果一致。基于NDUFA4在人结直肠癌细胞株中的表达差异，在后续研究中，我们分别在SW620细胞中过表达NDUFA4和在SW480细胞中下调NDUFA4表达，观察改变NDUFA4表达是否影响人CRC细胞的生长。图1-2NDUFA4在人结直肠癌细胞中的表达Fig.1-2TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCcells.ImmunofluorescencestainingwasusedtodetecttheexpressionofNDUFA4proteininhumanCRCcelllineSW620andSW480cells.Magnificance:60×.Therelativequantitivewascalculated.*P<0.05.3.1.3NDUFA4在人CRC直肠癌SW620细胞和SW480细胞中的表达为了观察改变NDUFA4表达对SW620和SW480细胞生长的影响，我们首先通过RealtimePCR和WesternBlot技术分别检测各组细胞中NDUFA4的表达。结果发现：在SW620细胞中，与p-Cont对照组相比，p-NDUFA4过表达组中NDUFA4的表达水平明显上调（图1-3A-C，P<0.05），而在SW480细胞中，sh-NDUFA4组中NDUFA4的表达水平明显低于sh-NC组，且差异具有统计学意义（图1-3D-F，P<0.05）。
遵义医科大学硕士学位论文刘士明31图1-3NDUFA4在人结直肠癌SW620和SW480细胞中的表达情况Fig.1-3TheexpressionofNDUFA4inhumanCRCSW620andSW480cells.HumanCRCSW620andSW480cellswereinstantaneouslytransfectedwithp-NDUFA4,p-Cont,sh-NDUFA4,orsh-NC,respectively.ThemRNAandproteinexpressionofNDUFA4weredeterminedbyRealtimePCR(A)(D)andWesternBlot(B)(E)andcalculated(C)(F).*P<0.05,**P<0.01.3.1.4NDUFA4对SW620和SW480细胞增殖和克隆形成能力的影响为了观察改变NDUFA4表达对结直肠癌细胞SW620和SW480细胞生长的影响，我们选用CCK-8法检测细胞的增殖活性，克隆形成实验检测了细胞的克隆形成能力。结果发现：在SW620细胞中，p-NDUFA4过表达组细胞的增殖能力和克隆形成能力较p-Cont对照组明显增加（图1-4A-C，P<0.05）；而在SW480细胞中，与sh-NC对照组相比，sh-NDUFA4下调组细胞的增殖能力和克隆形成能力明显降低（图1-4D-F，P<0.05），上述结果可说明NDUFA4基因的过表达可以有效促进SW620细胞的体外生长，而NDUFA4基因的下调能够有效抑制SW480细胞体外生长。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Notch1、Akt、PTEN及ABCG2在直肠癌干细胞中的表达研究[J]. 曲泽,姜东,侯明星. 内蒙古医科大学学报. 2020(01)
[2]下调NDUFA4对人结直肠癌SW480细胞体外生长的影响[J]. 刘士明,丁涛,雷良玉,胡琳,冒灵,陈超,郭萌萌,徐林. 遵义医学院学报. 2019(04)
[3]Ⅰ型辅酶脱氢酶1α亚复合物4过表达对人结直肠癌细胞上皮-间质转化的作用[J]. 刘士明,丁涛,雷良玉,胡琳,冒灵,陈超,郭萌萌,徐林. 医学研究生学报. 2019(06)
[4]NDUFA4过表达对人结直肠癌细胞体外生长的影响[J]. 刘士明,丁涛,雷良玉,胡琳,冒灵,陈超,郭萌萌,徐林. 肿瘤防治研究. 2019(05)
[5]神经系统线粒体病[J]. 袁云. 中华神经科杂志. 2019 (04)
[6]细胞死亡调节因子GRIM-19在肿瘤及非肿瘤疾病中的作用[J]. 刘岩,汲坤. 沈阳医学院学报. 2018(03)
[7]Emergency resection surgery for colorectal cancer: Patterns of recurrent disease and survival[J]. Joe Littlechild,Muneer Junejo,Anne-Marie Simons,Finlay Curran,Darren Subar. World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2018(01)
[8]Colorectal cancer,screening and primary care: A mini literature review[J]. Athanasios Hadjipetrou,Dimitrios Anyfantakis,Christos G Galanakis,Miltiades Kastanakis,Serafim Kastanakis. World Journal of Gastroenterology. 2017(33)
[9]Colorectal cancer population screening programs worldwide in 2016: An update[J]. Mercedes Navarro,Andrea Nicolas,Angel Ferrandez,Angel Lanas. World Journal of Gastroenterology. 2017(20)
[10]富含亮氨酸蛋白LRP130抗体在恶性肿瘤中的表达和临床意义[J]. 胡云峰,崔洁,雷侠,张鸿毅. 陕西医学杂志. 2017(05)
硕士论文
[1]MRPL49、NDUFA3在卵巢癌组织中的蛋白表达及意义的研究[D]. 刘涛.中国医科大学 2018
[2]共表达siRNA-Stat3与GRIM-19质粒对甲状腺癌细胞的抑制效应及机理探讨[D]. 任仲喜.吉林大学 2012
本文编号：3315715
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