铜绿假单胞菌重组Bb（pGEX-OprF-I）疫苗构建及其免疫机制的研究
发布时间：2021-08-29 12:32
目的构建两歧双歧杆菌介导的铜绿假单胞菌外膜蛋白F-I疫苗,研究其对小鼠的保护力及免疫机制。方法以铜绿假单胞菌PA01标准株提取的基因组DNA为模板,PCR分别扩增OprF和OprI抗原基因,通过基因拼接法剪接获取OprF-I融合基因,插入pGEX-1λT,得到pGEX-OprF-I后电穿孔至E.coli BL21（DE3）,经IPTG诱导,用SDS-PAGE和Western blot对重组菌的表达情况进行分析和鉴定。将重组质粒电穿孔到两歧双歧杆菌中,构建重组Bb（pGEX-OprF-I）疫苗并进行双酶切和PCR鉴定,然后分析及鉴定其诱导表达产物。将rBb（pGEX-OprF-I）疫苗灌胃接种小鼠,PA01株攻击后2周杀鼠,常规ELISA检测血清抗体,分离肺组织计数肺细菌负荷,分离脾脏制备脾细胞悬液,分别用MTT法和FCM检测脾细胞的增殖、亚群及凋亡,PCR检测脾细胞因子变化。结果成功扩增1050 bp的OprF基因、194 bp的OprI基因和1289 bp的重庆市科委地方病重大专项基金项目（No.2008AB5055,2008AB5008,2008AB5054）OprF-I融合基因,...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
OprF和OprI基因PCR产物鉴定图谱
重庆医科大学硕士研究生学位论文17图2OprF,OprI及OprF-I融合基因PCR产物鉴定图谱Fig.2PCRidentificationofOprFlinker,OprIlinkerandOprF-IfusiongeneM:DNAmarker;1-2:PCRproductofOprFlinker;3-4:PCRproductofOprIlinker;5-8:PCRproductofOprF-Ifusiongene2.3质粒pGEX-OprF-I的酶切鉴定以pGEX-1λT作对照，提取质粒pGEX-OprF-I进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，可得到4947bp的载体片段和1289bp的OprF-I融合基因片段（图3）。图3质粒pGEX-OprF-I的双酶切鉴定Fig.3IdentificationofenzymedigestionofpGEX-OprF-IM:DNAmarker;1-2:pGEX-1λT;3-4:ProductsofpGEX-OprF-Iwithenzymedigestion2.4质粒pGEX-OprF-I的PCR鉴定以从重组菌中提取的质粒pGEX-OprF-I为模板，P1、P4为引物，PCR扩增出1289bp的OprF-I基因片段（图4）。
重庆医科大学硕士研究生学位论文17图2OprF,OprI及OprF-I融合基因PCR产物鉴定图谱Fig.2PCRidentificationofOprFlinker,OprIlinkerandOprF-IfusiongeneM:DNAmarker;1-2:PCRproductofOprFlinker;3-4:PCRproductofOprIlinker;5-8:PCRproductofOprF-Ifusiongene2.3质粒pGEX-OprF-I的酶切鉴定以pGEX-1λT作对照，提取质粒pGEX-OprF-I进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，可得到4947bp的载体片段和1289bp的OprF-I融合基因片段（图3）。图3质粒pGEX-OprF-I的双酶切鉴定Fig.3IdentificationofenzymedigestionofpGEX-OprF-IM:DNAmarker;1-2:pGEX-1λT;3-4:ProductsofpGEX-OprF-Iwithenzymedigestion2.4质粒pGEX-OprF-I的PCR鉴定以从重组菌中提取的质粒pGEX-OprF-I为模板，P1、P4为引物，PCR扩增出1289bp的OprF-I基因片段（图4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]铜绿假单胞菌OprF/I融合蛋白疫苗研制现状[J]. 梁诚诚,李文桂. 生物技术通讯. 2019(01)
[2]分子佐剂IL-17与IL-2对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI免疫效果的影响[J]. 卿蕊,向晴可,刘众齐,肖非,阳帆. 免疫学杂志. 2018(07)
[3]铜绿假单胞菌重组Bb-OprI疫苗诱导小鼠保护力和脾细胞因子基因表达变化的研究[J]. 刘潇,李文桂. 中国病原生物学杂志. 2018(03)
[4]铜绿假单胞菌OprF疫苗的研究进展[J]. 李文桂,陈雅棠. 热带医学杂志. 2016(11)
[5]超级细菌疫苗研究进展[J]. 邹全明,石云. 第三军医大学学报. 2016(07)
[6]铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ的原核表达、纯化及免疫保护作用研究[J]. 陈春琳,刘祥,王成祥,张晓娟,俱雄,张涛,吴三桥. 生物技术通报. 2015(07)
[7]日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗诱导小鼠脾细胞增殖、凋亡及亚群变化的研究[J]. 谭建蓉,李文桂,覃婷. 中国病原生物学杂志. 2015(02)
[8]日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21中的表达[J]. 谭建蓉,李文桂,张丽. 国际检验医学杂志. 2014(23)
[9]重组双歧杆菌研究进展[J]. 刘美辰,贺莉芳,周必英. 中国病原生物学杂志. 2014(05)
[10]双歧杆菌介导的福氏志贺菌Bb-ipaB疫苗的构建[J]. 王国富,薛士鹏,白丽,吴利先. 大理学院学报. 2013(03)
本文编号：3370663
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
OprF和OprI基因PCR产物鉴定图谱
重庆医科大学硕士研究生学位论文17图2OprF,OprI及OprF-I融合基因PCR产物鉴定图谱Fig.2PCRidentificationofOprFlinker,OprIlinkerandOprF-IfusiongeneM:DNAmarker;1-2:PCRproductofOprFlinker;3-4:PCRproductofOprIlinker;5-8:PCRproductofOprF-Ifusiongene2.3质粒pGEX-OprF-I的酶切鉴定以pGEX-1λT作对照，提取质粒pGEX-OprF-I进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，可得到4947bp的载体片段和1289bp的OprF-I融合基因片段（图3）。图3质粒pGEX-OprF-I的双酶切鉴定Fig.3IdentificationofenzymedigestionofpGEX-OprF-IM:DNAmarker;1-2:pGEX-1λT;3-4:ProductsofpGEX-OprF-Iwithenzymedigestion2.4质粒pGEX-OprF-I的PCR鉴定以从重组菌中提取的质粒pGEX-OprF-I为模板，P1、P4为引物，PCR扩增出1289bp的OprF-I基因片段（图4）。
重庆医科大学硕士研究生学位论文17图2OprF,OprI及OprF-I融合基因PCR产物鉴定图谱Fig.2PCRidentificationofOprFlinker,OprIlinkerandOprF-IfusiongeneM:DNAmarker;1-2:PCRproductofOprFlinker;3-4:PCRproductofOprIlinker;5-8:PCRproductofOprF-Ifusiongene2.3质粒pGEX-OprF-I的酶切鉴定以pGEX-1λT作对照，提取质粒pGEX-OprF-I进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，可得到4947bp的载体片段和1289bp的OprF-I融合基因片段（图3）。图3质粒pGEX-OprF-I的双酶切鉴定Fig.3IdentificationofenzymedigestionofpGEX-OprF-IM:DNAmarker;1-2:pGEX-1λT;3-4:ProductsofpGEX-OprF-Iwithenzymedigestion2.4质粒pGEX-OprF-I的PCR鉴定以从重组菌中提取的质粒pGEX-OprF-I为模板，P1、P4为引物，PCR扩增出1289bp的OprF-I基因片段（图4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]铜绿假单胞菌OprF/I融合蛋白疫苗研制现状[J]. 梁诚诚,李文桂. 生物技术通讯. 2019(01)
[2]分子佐剂IL-17与IL-2对铜绿假单胞菌外膜蛋白OprI免疫效果的影响[J]. 卿蕊,向晴可,刘众齐,肖非,阳帆. 免疫学杂志. 2018(07)
[3]铜绿假单胞菌重组Bb-OprI疫苗诱导小鼠保护力和脾细胞因子基因表达变化的研究[J]. 刘潇,李文桂. 中国病原生物学杂志. 2018(03)
[4]铜绿假单胞菌OprF疫苗的研究进展[J]. 李文桂,陈雅棠. 热带医学杂志. 2016(11)
[5]超级细菌疫苗研究进展[J]. 邹全明,石云. 第三军医大学学报. 2016(07)
[6]铜绿假单胞菌外膜蛋白Ⅰ的原核表达、纯化及免疫保护作用研究[J]. 陈春琳,刘祥,王成祥,张晓娟,俱雄,张涛,吴三桥. 生物技术通报. 2015(07)
[7]日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗诱导小鼠脾细胞增殖、凋亡及亚群变化的研究[J]. 谭建蓉,李文桂,覃婷. 中国病原生物学杂志. 2015(02)
[8]日本血吸虫重组质粒pGEX-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21中的表达[J]. 谭建蓉,李文桂,张丽. 国际检验医学杂志. 2014(23)
[9]重组双歧杆菌研究进展[J]. 刘美辰,贺莉芳,周必英. 中国病原生物学杂志. 2014(05)
[10]双歧杆菌介导的福氏志贺菌Bb-ipaB疫苗的构建[J]. 王国富,薛士鹏,白丽,吴利先. 大理学院学报. 2013(03)
本文编号：3370663
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