敲低PES1基因表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭和迁移

发布时间：2017-05-01 05:08

  本文关键词：敲低PES1基因表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭和迁移，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:近几十年来,癌症在我国的发病率一直处于上升趋势,肺癌、乳腺癌、前列腺癌尤为突出。乳腺癌已成为威胁女性健康最重要的疾病之一。随着科技的进步,对于乳腺癌的筛查及诊治有了长足的进步,然而其病死率仍然没有得到有效控制。影响乳腺癌治疗的因素有很多,特别是癌细胞的易转移性和侵袭能力影响治疗效果。通过淋巴管和血管等途径,肿瘤细胞转移至脑、肺、肝等组织和器官,产生转移灶,导致乳腺癌患者死亡。研究发现,上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)过程在肿瘤细胞的迁移和侵袭中作用重大。EMT是指上皮细胞通过特定程序向间充质细胞转化的生物过程,在胚胎发育、慢性炎症、组织重塑、癌转移中起重要作用。其特点是细胞黏附分子表达减少、细胞角蛋白转化成波形蛋白(Vimentin)及细胞骨架和形态上具有间充质细胞的特征等。在EMT的过程中,上皮细胞失去细胞极性,损失与基底膜连接等上皮样表型,获得了较高的迁移与侵袭等间充质细胞表型。PES1基因是在逆转录病毒诱发斑马鱼胚胎发育缺陷的研究中发现的。研究表明,PES1在核糖体生成、细胞周期和细胞增殖中有着重要作用。它是一种在乳腺癌细胞中高表达的基因,主要通过调控类固醇激素信号传导途径中的雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)发挥作用,它能够增强ERα稳定性,减少ERβ表达。在ER阳性的乳腺癌中,PES1调节雌激素受体α和雌激素受体β之间的平衡,影响乳腺癌的发生发展进程。在ER阴性的乳腺癌细胞中,PES1促进细胞的增殖,发挥一种癌基因的作用。到目前为止,尚不清楚PES1是否影响肿瘤细胞的迁移和侵袭。目的:建立稳定表达PES1 shRNA及阴性对照PES1 shRNA con的MDA-MB-231乳腺癌细胞系,研究敲低PES1基因表达对细胞迁移及侵袭的影响。方法:1.设计合成PES1基因的siRNA引物,克隆到pSHI1-H1-Puro载体上;经过慢病毒的包装,测定病毒滴度;感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,建立敲低PES1基因表达的MDA-MB-231稳定细胞系;采用RT-qPCR和Western Blot方法检测PES1在mRNA和蛋白质水平的变化;2.利用细胞划痕实验观察细胞迁移能力的变化;3.利用Transwell实验检测PES1对细胞侵袭能力的影响。结果和结论:利用敲低PES1基因表达的慢病毒载体,建立了PES1 shRNA的MDA-MB-231的稳定克隆细胞系,观察PES1是否影响细胞的迁移和侵袭能力。研究结果表明,敲低PES1的表达能够有效抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。
【关键词】：PES1 乳腺癌细胞 迁移 侵袭
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-19
• 1.1 材料12-13
• 1.2 方法13-19
• 1.2.1 细胞培养13
• 1.2.2 PES1 shRNA慢病毒表达载体构建13-15
• 1.2.3 PES1 shRNA慢病毒表达质粒鉴定15-16
• 1.2.4 PES1 shRNA慢病毒表达载体包装16
• 1.2.5 慢病毒表达载体滴度测定16
• 1.2.6 PES1 shRNA的MDA-MB-231细胞株的构建16-17
• 1.2.7 RT-PCR17-18
• 1.2.8 Western印迹18
• 1.2.9 细胞划痕实验18
• 1.2.10 Transwell实验18-19
• 结果19-23
• 2.1 pSIH1-H1-Puro酶切验证19
• 2.2 PES1 shRNA慢病毒表达载体测序分析19-20
• 2.3 PES1 shRNA慢病毒表达载体作用效果检测20
• 2.4 MDA-MB-231敲低PES1稳定细胞系的建立20-21
• 2.5 敲低PES1基因抑制MDA-MB-231细胞的迁移21-22
• 2.6 敲低PES1基因抑制MDA-MB-231细胞的侵袭22-23
• 讨论23-24
• 结论24-25
• 参考文献25-27
• 综述27-33
• 参考文献31-33
• 攻读学位期间发表文章情况33-34
• 致谢34-35

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本文编号：338273