IL-4通过STAT6-JMJD3通路诱导Kupffer细胞M2极化减轻大鼠肝移植术后缺血再灌注损伤
发布时间：2021-09-05 01:55
目的:白细胞介素4（Interleukin-4,IL-4）能减轻大鼠肝移植后的缺血再灌注及免疫排斥反应,但具体机制仍不清除。信号转导及转录因子6（signal transducers and activators of transcription 6,STAT6）和含十字形结构域蛋白3（Jumonji domain containing 3,JMJD3）在巨噬细胞极化中发挥重要作用。本研究主要探讨Kupffer细胞（KCs）及STAT6-JMJD3信号通路在大鼠肝移植后肝脏缺血再灌注中的作用。方法:建立大鼠肝移植模型（Liver transplantation,LT）,分为Sham组、LT组、LT+NS组,LT+IL-4组。LT+NS组和LT+IL-4组供体大鼠肝脏在冷存储期间,分别通过门静脉持续微量灌注生理盐水（Normal saline,NS）及溶于生理盐水中的IL-4。术后6小时检测肝功、病理改变、细胞凋亡及炎症的变化情况。分离各组肝移植后肝脏的KCs,流式细胞计数仪、RT-PCR及Western Blot检测KCs极化及STAT6-JMJD3通路的变化。在体外实验中:分离得到K...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
IL-4减轻大鼠肝移植6小时后缺血再灌注损伤
重庆医科大学硕士研究生学位论文22TUNEL检测Sham组、LT组、LT+NS、LT+IL-4组在肝移植后6小时肝脏凋亡水平，与Sham组相比，肝移植后6小时肝脏组织中发生凋亡的细胞数明显增加。LT组和LT+NS组的凋亡数量无明显差异，但是，对LT+IL-4组中的检测结果发现，该组的凋亡细胞明显降低(图2A、B)。对四组中肝脏组织中的凋亡相关蛋白表水平进行检测发现，肝移植后，肝脏组织中抗凋亡蛋Bcl2水平明显减少，而促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明显增加。灌注生理盐水对肝移植造成的凋亡无明显影响。但是IL-4处理能明显减少促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明，同时增加肝脏组织中抗凋亡蛋Bcl2水平（图２C）。图2.IL-4降低大鼠肝移植6小时后肝脏细胞凋亡水平。A-B：荧光TUNEL检测各组肝脏凋亡细胞水平并计数（200×）；C：WesternBlot检测各组肝组织凋亡相关蛋白的表达水平并行相对定量分析。*P<0.05,与Sham比较；#P<0.05，与LT+IL-4比较。Figure2.IL-4suppressedapoptosisat6hoursafterratlivertransplantation.A-B:FluorescentTUNELwasusedtoinvestigatecellapoptosisinspecimensofeachgroup(200×);C:TheproteinsrelatedtoapoptosisinliverswastestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.2.2IL-4减轻大鼠肝移植后的炎症水平
重庆医科大学硕士研究生学位论文23分别检测Sham组、LT组、LT+NS、LT+IL-4组中肝脏组织中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平发现肝移植后肝脏中上述促炎因子水平明显增加，持续缓慢灌注NS对炎症因子的mRNA水平无明显变化，而持续缓慢灌注IL-4能降低上述因子的mRNA水平（图3A）。进一步检测各组肝脏组织中IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平检测也发现,与LT、LT+NS组相比，IL-4的处理能明显降低IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平（图3B）。因此通过对供体肝脏持续灌注IL-4能降低肝移植后肝脏中的炎症反应。图3.IL-4减轻大鼠肝移植6小时后的炎症水平。A：RT-PCR检测术后6小时肝脏中的炎症因子的mRNA水平；B：WesternBlot检测术后6小时肝组织炎症相关蛋白的水平及相对定量分析。*P<0.05,与Sham比较；#P<0.05，与LT+IL-4比较。Figure3.IL-4couldsuppressinflammationat6hoursafterratlivertransplantation.A:ThemRNAofinflammatorycytokineswasdetectedbyRT-PCR;B:TheproteinsrelatedtoinflammationweretestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.3IL-4能促进肝移植后KCsM2型极化，同时激活KCs中的STAT6-JMJD3信号通路2.3.1IL-4促进肝移植后KCs向M2型极化分离Sham组、LT组、LT+NS、LT+IL-4组的肝移植后6小时的KCs并检测M2型KCs的比例变化。流式细胞结果显示：与Sham组相比，LT、LT+NS组中M2型KCs比例增加不明显，但LT+IL-4组中M2型KCs比例明显增加（图4A）。RT-PCR检测M1型和M2型巨噬细胞标记基因TNF-α、iNOS、Retnla、Arg1的
本文编号：3384440
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
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【学位级别】：硕士
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IL-4减轻大鼠肝移植6小时后缺血再灌注损伤
重庆医科大学硕士研究生学位论文22TUNEL检测Sham组、LT组、LT+NS、LT+IL-4组在肝移植后6小时肝脏凋亡水平，与Sham组相比，肝移植后6小时肝脏组织中发生凋亡的细胞数明显增加。LT组和LT+NS组的凋亡数量无明显差异，但是，对LT+IL-4组中的检测结果发现，该组的凋亡细胞明显降低(图2A、B)。对四组中肝脏组织中的凋亡相关蛋白表水平进行检测发现，肝移植后，肝脏组织中抗凋亡蛋Bcl2水平明显减少，而促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明显增加。灌注生理盐水对肝移植造成的凋亡无明显影响。但是IL-4处理能明显减少促凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平明，同时增加肝脏组织中抗凋亡蛋Bcl2水平（图２C）。图2.IL-4降低大鼠肝移植6小时后肝脏细胞凋亡水平。A-B：荧光TUNEL检测各组肝脏凋亡细胞水平并计数（200×）；C：WesternBlot检测各组肝组织凋亡相关蛋白的表达水平并行相对定量分析。*P<0.05,与Sham比较；#P<0.05，与LT+IL-4比较。Figure2.IL-4suppressedapoptosisat6hoursafterratlivertransplantation.A-B:FluorescentTUNELwasusedtoinvestigatecellapoptosisinspecimensofeachgroup(200×);C:TheproteinsrelatedtoapoptosisinliverswastestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.2.2IL-4减轻大鼠肝移植后的炎症水平
重庆医科大学硕士研究生学位论文23分别检测Sham组、LT组、LT+NS、LT+IL-4组中肝脏组织中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平发现肝移植后肝脏中上述促炎因子水平明显增加，持续缓慢灌注NS对炎症因子的mRNA水平无明显变化，而持续缓慢灌注IL-4能降低上述因子的mRNA水平（图3A）。进一步检测各组肝脏组织中IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平检测也发现,与LT、LT+NS组相比，IL-4的处理能明显降低IL-1β、p65及p-p65的蛋白水平（图3B）。因此通过对供体肝脏持续灌注IL-4能降低肝移植后肝脏中的炎症反应。图3.IL-4减轻大鼠肝移植6小时后的炎症水平。A：RT-PCR检测术后6小时肝脏中的炎症因子的mRNA水平；B：WesternBlot检测术后6小时肝组织炎症相关蛋白的水平及相对定量分析。*P<0.05,与Sham比较；#P<0.05，与LT+IL-4比较。Figure3.IL-4couldsuppressinflammationat6hoursafterratlivertransplantation.A:ThemRNAofinflammatorycytokineswasdetectedbyRT-PCR;B:TheproteinsrelatedtoinflammationweretestedbyWesternBlot.*P<0.05vstheShamgroup,#P<0.05vstheLT+IL-4group.2.3IL-4能促进肝移植后KCsM2型极化，同时激活KCs中的STAT6-JMJD3信号通路2.3.1IL-4促进肝移植后KCs向M2型极化分离Sham组、LT组、LT+NS、LT+IL-4组的肝移植后6小时的KCs并检测M2型KCs的比例变化。流式细胞结果显示：与Sham组相比，LT、LT+NS组中M2型KCs比例增加不明显，但LT+IL-4组中M2型KCs比例明显增加（图4A）。RT-PCR检测M1型和M2型巨噬细胞标记基因TNF-α、iNOS、Retnla、Arg1的
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