SETDB1通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌发生分子机制的初步研究

发布时间：2021-09-08 16:48

　　目的:结直肠癌是最常见恶性肿瘤之一,在我国居癌症发病率和死亡率的第五位。结直肠癌发生过程中会出现原癌基因的激活、抑癌基因的失活、错配修复基因改变、凋亡调节紊乱等一系列生物学变化。目前,仍没有能够监控或体现这些生物学变化的高效分子标记物。因此,研究结直肠癌相关基因及其功能,不仅有利于阐明结直肠癌发生的分子机制,还可能为临床诊治、药物筛选及预后判断提供新的分子标记物。SETDB1（SET domain bifurcated 1,SET结构域分支型1）蛋白是一种组蛋白甲基转移酶,在多种人类实体瘤中呈现高表达,其高表达与肿瘤的生长、转移密切相关。近年来的研究表明,SETDB1很可能是一种促癌基因,但SETDB1在结直肠癌中的功能及分子机制仍不清楚。本课题拟在临床标本、体外实验、体内动物模型中研究SETDB1在结直肠癌发生中的功能,并通过体外实验研究SETDB1在结直肠癌中调控Wnt/β-catenin信号通路的分子机制,进而为结直肠肿瘤的发生提供新的理论依据。方法:1、采用免疫组织化学技术检测SETDB1在结直肠癌组织中的表达情况,并分析SETDB1在癌组织中的表达与各临床病理参数的关系。2、... 

【文章来源】：西南医科大学四川省

【文章页数】：107 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SETDB1在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达情况（200×）（A）癌旁组织；（B）癌组织

西南医科大学硕士学位论文-39-3验证SETDB1过表达/干扰效率通过RT-qPCR和WesternBlot检测稳定转染SETDB1过表达/干扰质粒后的HCT116、SW480细胞株中SETDB1mRNA和蛋白的表达情况。结果提示：HCT116-SETDB1及SW480-SETDB1细胞中的SETDB1mRNA和蛋白水平较对照组明显升高（见图3.1），说明建立过表达SETDB1细胞株成功，可进行后续实验。在敲低SETDB1的细胞株中，HCT116-ShRNA1及SW480-ShRNA1细胞中的SETDB1mRNA和蛋白水平较对照组明显下降（见图3.2），干扰SETDB1成功，因此本课题选用HCT116-ShRNA1及SW480-ShRNA1细胞进行后续实验。图3.1稳定过表达SETDB1的HCT116/SW480细胞株的转染效率（***，P<0.001）(A)&(B)：RT-qPCR；(C)&(D)：WesternBlotFigure3.1ThetransfectionefficiencyofHCT116/SW480celllineswithstableoverexpression(***，P<0.001)(A)&(B)：RT-qPCR；(C)&(D)：WesternBlot

西南医科大学硕士学位论文-40-4过表达/敲低SETDB1对HCT116/SW480细胞株生物学功能的影响4.1过表达/敲低SETDB1对HCT116/SW480细胞体外增殖能力的影响首先通过CCK8实验检测稳定过表达/敲低SETDB1后的HCT116、SW480细胞株增殖能力的变化，连续检测5天存活细胞的吸光（OD）值。结果显示，从第二天起，HCT116-SETDB1、SW480-SETDB1细胞增殖速度较对照组明显增快，HCT116-ShRNA1、SW480-ShRNA1细胞增殖能力较对照组明显下降（见图4.1.1）。图3.2稳定敲低SETDB1的HCT116/SW480细胞株的转染效率（*，P<0.05；***，P<0.001）(A)&(B)：RT-QPCR；(C)&(D)：WesternBlotFigure3.2ThetransfectionefficiencyofHCT116/SW480celllineswithstableknockdown(*，P<0.05；***，P<0.001)(A)&(B)：RT-QPCR；(C)&(D)：WesternBlot

【参考文献】：
期刊论文
[1]SETDB1在胃癌中的表达及其临床意义[J]. 李金梅,陈红,杜强,王旭,马秋双,李小莉,张金库.  临床与病理杂志. 2019(04)
[2]SetDB1和β-catenin在结直肠癌中的表达及其意义[J]. 卢子剑,寇玉伶,郭庆喜,熊小明,孙兴旺.  西南医科大学学报. 2018(02)
[3]Histone methyltransferases and demethylases:regulators in balancing osteogenic and adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells[J]. Peng Deng,Qian-Ming Chen,Christine Hong,Cun-Yu Wang.  International Journal of Oral Science. 2015(04)
[4]Twist2 is a valuable prognostic biomarker for colorectal cancer[J]. Hao Yu,Guang-Zhi Jin,Kai Liu,Hui Dong,Hua Yu,Ji-Cheng Duan,Zhe Li,Wei Dong,Wen-Ming Cong,Jia-He Yang.  World Journal of Gastroenterology. 2013(15)



本文编号：3391138