大鼠肺匀浆上清液体外诱导骨髓间充质干细胞分化的实验研究

发布时间：2017-05-02 09:18

  本文关键词：大鼠肺匀浆上清液体外诱导骨髓间充质干细胞分化的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨大鼠肺匀浆上清液诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化的可行性。方法：利用全骨髓贴壁分离法分离、纯化大鼠的间充质干细胞,观察细胞的形态,绘制生长曲线,并采用流式细胞术检测细胞表面抗原CD29、CD90、CD45、CD34、CD49d的表达情况。经骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导液诱导后,分别采用茜素红染色法、油红O染色法、甲苯胺蓝染色法检测骨髓间充质干细胞的诱导分化情况。正常肺组织和博来霉素诱导的损伤肺组织,分别提取匀浆上清液,诱导第3代骨髓间充质干细胞。实验组分为三组：骨髓间充质干细胞组,骨髓间充质干细胞+正常大鼠肺匀浆上清液组,骨髓间充质干细胞+博来霉素损伤大鼠肺匀浆上清液组,持续诱导10天,通过细胞免疫荧光法和RT-PCR法分别在蛋白水平和基因水平检测SP-C的表达。结果：骨髓间充质干细胞培养到第3代时形成漩涡状、纺锤形、形态相对均一的贴壁细胞。流式细胞术检测结果显示其表面抗原CD29、CD90呈阳性,CD49d、CD34、CD45呈阴性。骨髓间充质干细胞经骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导液诱导后,茜素红染色呈红色,油红O染色呈橘红色,甲苯胺蓝呈蓝色。经肺匀浆上清液诱导后的骨髓间充质干细胞,细胞免疫荧光和RT-PCR显示各干预组均有SP-C蛋白的表达,对照组无SP-C蛋白的表达。统计学分析结果：正常及博来霉素损伤大鼠肺匀浆上清液诱导细胞免疫荧光SP-C蛋白的表达阳性率分别为13.29%及25.27%;RT-PCR检测显示博来霉素损伤的肺匀浆上清液阳性率较正常肺匀浆上清液高。结论：全骨髓贴壁分离法可以有效获得数量充足、生长状态良好并具有分化潜能的间充质干细胞。大鼠正常肺匀浆上清液和博来霉素损伤的肺匀浆上清液均可以诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化,博来霉素损伤的肺匀浆上清液比正常的肺匀浆上清液诱导能力更强。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 肺匀浆上清液 细胞分化 大鼠
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 中英文缩写词表8-9
• 前言9-11
• 文献综述 骨髓间充质干细胞的生物学特性及多向分化潜能11-20
• 第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定20-31
• 1 实验材料20-21
• 2 实验方法21-26
• 3 结果26-28
• 4 讨论28-31
• 第二部分 大鼠匀浆上清液体外诱导骨髓间充质干细胞分化的实验研究31-39
• 1 实验材料31-32
• 2 实验方法32-36
• 3 结果36-37
• 4 讨论37-39
• 第三部分 全文总结39-40
• 1.全文总结39
• 2.问题与展望39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-47
• 作者简介47
• 研究生期间发表的论文47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：340702