TRPM7通道对人口腔颊黏膜成纤维细胞增殖和迁移的影响

发布时间：2021-10-14 06:33

　　目的:探讨瞬时受体电位离子通道TRPM7（Transient Receptor Potential Melastatin 7）在人口腔颊黏膜成纤维细胞中是否表达,以及抑制TRPM7离子通道后对人口腔颊黏膜成纤维细胞增殖和迁移的影响。方法:本实验所采用的组织来源于西南医科大学附属医院口腔颌面外科手术室,采用组织块法体外培养人口腔颊黏膜成纤维细胞。1.分离纯化后经免疫荧光染色鉴定是否为成纤维细胞;2.接着采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫荧光法检测人口腔颊黏膜成纤维细胞中TRPM7离子通道的表达,全细胞膜片钳技术记录人口腔颊黏膜成纤维细胞TRPM7离子通道的全细胞电流;3.将培养的细胞设置为3组:对照组、TRPM7shRNA组和2-APB组。对照组为正常培养的人口腔颊黏膜成纤维细胞,不做特殊处理。TRPM7 shRNA组应用TRPM7 shRNA病毒转染人口腔颊黏膜成纤维细胞,48 h后倒置荧光显微镜下观察转染效果,再次采用RT-PCR检测TRPM7离子通道的表达,验证TRPM7离子通道是否抑制成功,采用全细胞膜片钳记录TRPM7 shRNA组人口腔颊黏膜成纤维细胞的全细胞电流... 

【文章来源】：西南医科大学四川省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

成纤维细胞原代培养（40×）

-26-图1.2第3代成纤维细胞（40×）Fig1.2Fibroblastsofthethirdgeneration(40×)1.3免疫荧光法鉴定成纤维细胞对纯化后的第3代人口腔颊黏膜成纤维细胞进行免疫荧光染色鉴定，在绿光激发下，倒置荧光显微镜下显示：波形蛋白组成纤维细胞能够被成纤维细胞的结构蛋白即波形蛋白的一抗结合，并在荧光显微镜绿光激发下呈红色，而角蛋白14组成纤维细胞不被上皮细胞的结构蛋白即角蛋白14的一抗结合，所以不被染色，DAPI染色使细胞核发出蓝色荧光，呈卵圆形。实验结果表明：本实验分离得到的成纤维细胞波形蛋白表达呈阳性（图1.3A），角蛋白表达呈阴性（图1.3B），符合成纤维细胞的生物学特征。

免疫荧

【参考文献】：
期刊论文
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[3]慢病毒载体介导miR-146a转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究[J]. 买买提沙吾提阿吉·麦麦提,马原,朱旭.  新疆医科大学学报. 2019(06)
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[9]转染携带Ifi204基因的慢病毒上调大鼠主动脉成纤维细胞的p204表达[J]. 胡慧,吴强,田茂波.  基础医学与临床. 2018(02)
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博士论文
[1]瞬时受体电位通道TRPM7在人鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞迁移能力影响的初步研究[D]. 陈健鹏.南方医科大学 2010
[2]离子通道TRPM7在小鼠心肌梗死后及TGFβ诱导的心脏纤维化中的作用[D]. 周永明.武汉大学 2010

硕士论文
[1]瞬时受体电位M7通道在喉癌及癌旁组织表达差异的初步研究[D]. 任晓彤.南方医科大学 2014
[2]TRPM7对人胚肺成纤维细胞增殖及分化的调控机制研究[D]. 于明哲.安徽医科大学 2013



本文编号：3435629