A2E与蓝光照射对人RPE细胞溶酶体及线粒体摄
发布时间：2021-10-15 05:53
目的:通过建立蓝光照射负载A2E的人RPE细胞光损伤模型,探索在此过程中A2E与蓝光对人RPE细胞内溶酶体及线粒体摄取、释放Ca2+的影响。方法:原代培养人RPE细胞,将传代至第四至第六代的细胞用于实验。同一个体的同一代细胞用于相同的检测指标,将细胞随机分为五组:对照组、蓝光光照组、蓝光光照+硝苯地平组、负载A2E+蓝光光照组、负载A2E+蓝光光照+硝苯地平组;蓝光光照强度（2000±500）Lux,时间6小时,光照结束后继续培养24小时;光照前2小时加入终浓度为25 μM的A2E;光照前1小时加入终浓度为10-4M的硝苯地平。（1）使用CaTM-2AM结合胞浆内的钙离子,激光扫描共聚焦显微镜观察每组RPE细胞的荧光变化并拍照,并通过软件分析荧光强度（2）使用Rhod-2 AM结合线粒体内的钙离子,激光扫描共聚焦显微镜观察各组线粒体钙离子荧光情况并拍照,分析荧光强度（3）使用LysoTracker Red DND-99标记人RPE细胞酸性溶酶体,Fluo-3 AM结合细胞内的钙离子,激光扫描共聚焦显微镜观察并拍照,二者共定位后分析溶酶体内钙离子荧光强度（4）将细胞分为四组:对照组、蓝光...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?人ＲＰＥ细胞??Ｆｉｇ．ｌ?Ｈｕｍａｎ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ??ｆｔ：?Ａ：．撼抚人ＲＰＥ细胞．（３?Ｂ：撩代人ＲＰＥ细：胞（７天＞?Ｃ：?Ｂ?３代人ＲＰＥ细胞
遵义医科大学硕±学位论文＇?罗茂梅??２．２人ＲＰＥ细胞鉴定??对第３代人ＲＰＥ细胞用鼠抗人角蛋白抗体进行免疫组化鉴定，ＲＰＥ细??胞胞浆呈棕黄色染色，为阳性染色（图２）。??图２人ＲＰＥ细胞角蛋白免疫化学染色（Ｘ１００）??Ｆｉｇ．２?Ｈｕｍａｎ?ＲＰＥ?ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ?ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（ｘｌＯＯ）??注：细胞胞浆内角蛋白呆棕黄色染色为阳性结果。??２．３各组ＲＰＥ细胞胞浆内钙离子荧光强度变化??激光共聚焦显微镜检测各组ＲＰＥ细胞胞浆Ｃａ２＋结果显示：胞浆钙离子与??ＣａＴＭ－２ＡＭ结合后呈红色荧光，各组荧光强度值、呈正态分布、方差齐，分别为??对照组（６０．２３５±０．３１８），蓝光光照组（６６．５９７±０．２５０），蓝光光照＋硝苯地平组??（６３．４７８±０．０８２），负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组（７３．９４９±０．０７９），负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝??．苯地平组（６９．４４４±０．３６８），总体比较差异具有统计学意义（Ｆ＝１３４９．６９６，户＜０．０５），??其中蓝光光照组、蓝光光照＋硝苯地平组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光??光照＋硝苯地平组内钙离子荧光强度均高于对照组，差异均具有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；??蓝光光照＋硝苯地平组内荧光强度低于蓝光光照组（尸＜〇．〇５），负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照??组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝苯地平组高于蓝光光照组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；??负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝苯地平组高于蓝光光照＋硝苯地平组，??２１??
遵义医科大学硕±学位论文＇?罗茂梅??差异均有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组荧光强度高于负载Ａ２Ｅ＋蓝??光光照＋硝苯地平组（＞Ｐ＜〇．〇５）。（见图３，图４，表１）??■■■??■??图３各组ＲＰＥ细胞胞桨内钙离子荧光强度比较（Ｘ６００）??Ｆｉｇ．３?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?ｏｆ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ??ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?（?ｘ?６００）??注：Ａ：对照组、Ｂ：蓝光光照组、Ｃ：蓝光光照＋硝苯地组、Ｄ：负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组、Ｅ：负载Ａ２Ｅ＋??蓝光光照＋硝苯地组。??表１各组ＲＰＥ细胞胞浆内钙离子荧光强度变化??Ｔａｂ．ｌ?Ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?ｏｆ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ??ｇｒｏｕｐ??分组?Ｎ?钙离予荧光强度（Ｘ±Ｓ）??对照紙?３?６０．２３５±０．３１８??蓝光光照组?３?６６．５９７±０．２５０Ａ??蓝光光廳＋硝苯地平祖?３?６３．４７８±０．０８２“??负载Ａ２Ｅ＋篮光光照组?３?７３．９４９±〇．〇７９ｉ＊＞??负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝苯地平组?３?６９．４４４±〇．３６８＊＊＊＃??Ｆ?１３４９．６９６??Ｐ?０．０００??．．注：：各组间．比较，表屏■＇统计学：露义（Ｆ＝１３４９．６９６，户＜０．〇５），▲ｉ５＜０．０５与对照｜１比较；＊Ｐ＜０．０５与蓝光；光??照羾比较；？户＜０．０５与蓝光光照＋賴苯地肀组比较；：，＜０．０５与．负载Ａ２Ｅ＋
本文编号：3437542
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?人ＲＰＥ细胞??Ｆｉｇ．ｌ?Ｈｕｍａｎ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ??ｆｔ：?Ａ：．撼抚人ＲＰＥ细胞．（３?Ｂ：撩代人ＲＰＥ细：胞（７天＞?Ｃ：?Ｂ?３代人ＲＰＥ细胞
遵义医科大学硕±学位论文＇?罗茂梅??２．２人ＲＰＥ细胞鉴定??对第３代人ＲＰＥ细胞用鼠抗人角蛋白抗体进行免疫组化鉴定，ＲＰＥ细??胞胞浆呈棕黄色染色，为阳性染色（图２）。??图２人ＲＰＥ细胞角蛋白免疫化学染色（Ｘ１００）??Ｆｉｇ．２?Ｈｕｍａｎ?ＲＰＥ?ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ?ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（ｘｌＯＯ）??注：细胞胞浆内角蛋白呆棕黄色染色为阳性结果。??２．３各组ＲＰＥ细胞胞浆内钙离子荧光强度变化??激光共聚焦显微镜检测各组ＲＰＥ细胞胞浆Ｃａ２＋结果显示：胞浆钙离子与??ＣａＴＭ－２ＡＭ结合后呈红色荧光，各组荧光强度值、呈正态分布、方差齐，分别为??对照组（６０．２３５±０．３１８），蓝光光照组（６６．５９７±０．２５０），蓝光光照＋硝苯地平组??（６３．４７８±０．０８２），负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组（７３．９４９±０．０７９），负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝??．苯地平组（６９．４４４±０．３６８），总体比较差异具有统计学意义（Ｆ＝１３４９．６９６，户＜０．０５），??其中蓝光光照组、蓝光光照＋硝苯地平组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光??光照＋硝苯地平组内钙离子荧光强度均高于对照组，差异均具有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；??蓝光光照＋硝苯地平组内荧光强度低于蓝光光照组（尸＜〇．〇５），负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照??组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝苯地平组高于蓝光光照组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；??负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组、负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝苯地平组高于蓝光光照＋硝苯地平组，??２１??
遵义医科大学硕±学位论文＇?罗茂梅??差异均有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）；负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组荧光强度高于负载Ａ２Ｅ＋蓝??光光照＋硝苯地平组（＞Ｐ＜〇．〇５）。（见图３，图４，表１）??■■■??■??图３各组ＲＰＥ细胞胞桨内钙离子荧光强度比较（Ｘ６００）??Ｆｉｇ．３?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?ｏｆ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ??ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?（?ｘ?６００）??注：Ａ：对照组、Ｂ：蓝光光照组、Ｃ：蓝光光照＋硝苯地组、Ｄ：负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照组、Ｅ：负载Ａ２Ｅ＋??蓝光光照＋硝苯地组。??表１各组ＲＰＥ细胞胞浆内钙离子荧光强度变化??Ｔａｂ．ｌ?Ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?ｏｆ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ??ｇｒｏｕｐ??分组?Ｎ?钙离予荧光强度（Ｘ±Ｓ）??对照紙?３?６０．２３５±０．３１８??蓝光光照组?３?６６．５９７±０．２５０Ａ??蓝光光廳＋硝苯地平祖?３?６３．４７８±０．０８２“??负载Ａ２Ｅ＋篮光光照组?３?７３．９４９±〇．〇７９ｉ＊＞??负载Ａ２Ｅ＋蓝光光照＋硝苯地平组?３?６９．４４４±〇．３６８＊＊＊＃??Ｆ?１３４９．６９６??Ｐ?０．０００??．．注：：各组间．比较，表屏■＇统计学：露义（Ｆ＝１３４９．６９６，户＜０．〇５），▲ｉ５＜０．０５与对照｜１比较；＊Ｐ＜０．０５与蓝光；光??照羾比较；？户＜０．０５与蓝光光照＋賴苯地肀组比较；：，＜０．０５与．负载Ａ２Ｅ＋
本文编号：3437542
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/mpalunwen/3437542.html
最近更新
教材专著
