金钗石斛生物碱对脂多糖诱导的BV2细胞NF-κB/NLRP3 通路的作用及作用机制

发布时间：2021-10-22 10:56

　　目的:探索金钗石斛生物碱（Dendorbium Nobile Lindl.alkaloids,DNLA）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导的BV2细胞炎症反应的保护作用及其作用机制。方法:以BV2细胞与LPS共同孵育构建神经细胞炎症模型。将BV2随机分为空白组,DNLA（350 ng/mL）单独给药组,LPS（100 ng/mL）组,LPS+DNLA（3.5 ng/mL）组和LPS+DNLA（350 ng/mL）组。给予同体积无血清培养基和各浓度DNLA预处理1h,加入LPS（100 ng/mL）诱导BV2细胞,使其激活并产生炎症反应。通过MTT法检测BV2细胞的增殖筛选最佳造模浓度;ELISA法检测细胞上清液中TNF-α的释放量确定筛选造模时间;Western Blot检测细胞总蛋白裂解液中Iba-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、NEK7、GSDMD,以及胞浆蛋白提取液和胞核蛋白提取液中NF-κB p65及其磷酸化产物p-NF-κB p65、κBα及其磷酸化产物p-IκBα的蛋白表达水平;IF技术检测Iba-1蛋白变化、NF-κB在BV2细胞核内... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

NLRP3调控炎症反应

遵义医科大学硕士学位论文刘姣姣17时间和浓度增加，细胞突起逐渐增加，胞体逐渐增大，细胞形态出现明显改变。此外，用LPS(100ng/mL)分别处理BV2细胞15min、30min和60min，分别提取胞浆蛋白和胞核蛋白，测定IκBα和NF-κB以及二者磷酸化蛋白表达变化，如图5、图6所示，在60min时，蛋白表达水平出现显著性差异。图2不同浓度LPS对BV2细胞活性的影响注：*p<0.05vs.空白组。Fig.2.EffectsofLPSonthecellviabilityofBV2.CellswerestimulatedbyLPS(10,100,and1000ng/mL)for3hor6h.Resultswerethemean±SEMfromsevenindependentexperimentsperformedinsextuplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.图3LPS影响不同时间点细胞上清中TNF-α含量注：*p<0.05vs.空白组。Fig.3.TNF-αproductioninculturalsupernatantswereaffectedbyLPSatdifferenttimepoints.Dataexpressedasmean±SEMfromthreeindependentexperimentsimplementedintriplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.

遵义医科大学硕士学位论文刘姣姣17时间和浓度增加，细胞突起逐渐增加，胞体逐渐增大，细胞形态出现明显改变。此外，用LPS(100ng/mL)分别处理BV2细胞15min、30min和60min，分别提取胞浆蛋白和胞核蛋白，测定IκBα和NF-κB以及二者磷酸化蛋白表达变化，如图5、图6所示，在60min时，蛋白表达水平出现显著性差异。图2不同浓度LPS对BV2细胞活性的影响注：*p<0.05vs.空白组。Fig.2.EffectsofLPSonthecellviabilityofBV2.CellswerestimulatedbyLPS(10,100,and1000ng/mL)for3hor6h.Resultswerethemean±SEMfromsevenindependentexperimentsperformedinsextuplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.图3LPS影响不同时间点细胞上清中TNF-α含量注：*p<0.05vs.空白组。Fig.3.TNF-αproductioninculturalsupernatantswereaffectedbyLPSatdifferenttimepoints.Dataexpressedasmean±SEMfromthreeindependentexperimentsimplementedintriplicate.*p<0.05comparedwiththecontrol.

【参考文献】：
期刊论文
[1]Sex Differences in Neuropathology and Cognitive Behavior in APP/PS1/tau Triple-Transgenic Mouse Model of Alzheimer’s Disease[J]. Jun-Ting Yang,Zhao-Jun Wang,Hong-Yan Cai,Li Yuan,Meng-Ming Hu,Mei-Na Wu,Jin-Shun Qi.  Neuroscience Bulletin. 2018(05)

硕士论文
[1]金钗石斛总生物碱对APP/PS1转基因小鼠学习记忆影响及其相关因素研究[D]. 杨小惠.遵义医学院 2017
[2]金钗石斛总生物碱对ApoE-/-小鼠高血脂和血管动脉粥样硬化的影响[D]. 陈晶.遵义医学院 2016



本文编号：3450956