星形胶质细胞兴奋性氨基酸转运体2在慢性偏头痛中枢敏化中的作用及机制研究

发布时间：2021-11-04 04:32

　　背景:中枢敏化是慢性偏头痛（chronic migraine,CM）的潜在发病机制,并且与持续的神经元过度兴奋有关。兴奋性氨基酸转运体2（excitatory amino acid transporter 2,EAAT2）的功能障碍将突触间隙内谷氨酸的大量积累,使谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体过度激活,从而导致突触可塑性的增强而诱发中枢敏化。然而,星形胶质细胞EAAT2在CM病理机制中的作用以及是否为CM的潜在治疗靶点未知。因此,本研究旨在探讨EAAT2在CM中枢敏化中的作用,并探索EAAT2表达增强剂LDN-212320对CM大鼠的治疗潜力。方法:1.将雄性Sprague-Dawley大鼠通过连续7天的硬脑膜炎性汤（inflammatory soup,IS）输注以构建慢性偏头痛大鼠模型。通过测量CM大鼠机械痛阈值和热痛阈值的变化以及三叉神经脊束尾核部位（trigeminal nucleus caudalis,TNC）降钙素基因相关钛（calcitonin gene-related peptide,CGRP）蛋白水平表达的变化来评... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

反复IS/PBS输注后大鼠痛阈值和TNC部位CGRP表达的变化

重庆医科大学硕士研究生学位论文29图2.大脑TNC区域示意图Fig.2SchematicrepresentationofthebrainregionforTNC.ThewhitedottedframerepresentstheTNCregionsandthewhitesolidlinerectangularboxintheTNCareaswereselectedfortheanalysisofastrocytes.NucleiwerelabeledwithDAPI(blue),andastrocyteswerelabeledwithGFAP(red).2.5数据统计学分析使用SPSS22.0软件进行统计学分析，所有数据均以均数±标准差形式表示。采用GraphPadPrism7软件生成图形，统计分析结果以箱型图的形式呈现。在进行统计分析之前，使用Shapiro-Wilk（S-W）正态性检验来检验所有数据是否符合正态性，并分别使用F检验或Bartlett检验方差齐性。使用SPSS软件对数据进行Z评分检验以识别异常值，Z评分<-3或>3的数据被认为是异常值，在本研究中没有数据被识别为异常值。行为学数据（机械痛阈值和热痛阈值）采用双向方差分析和Bonferroni事后检验进行评估。两组数据间的差异采用独立样本T检验进行分析，两组以上数据采用单因素方差分析和Bonferroni事后检验进行多重比较。P<0.05被认为具有统计学意义。

重庆医科大学硕士研究生学位论文31图3.EAAT2在TNC部位的表达及定位Fig.3ThelocalizationofEAAT2andtheexpressionlevelsintheTNC.a-b.EAAT2proteinexpressionintheTNCoftheCMgroupwasremarkablydecreasedcomparedtothatintheshamgroup.Proteinexpressioninthebargraphsisshownrelativetotheintensitybeta-actin/GAPDH.c.EAAT2mRNAexpressionintheTNCoftheCMgroupwasconsistentwithEAAT2proteinexpressionandwasalsosignificantlydecreased(n=6ratspergroup,*P<0.05comparedwiththeshamgroup).d.DoubleimmunofluorescencestainingofGFAP(green)withEAAT2(red)intheTNC.EAAT2wasmainlyexpressedonastrocytes(shownbyarrows)(n=3rats,5picturesperrats,scalebar=20μm).Thestatisticalanalysisresultswerepresentedinbox-plots,theboxdimensionshowsthemedianandinterquartilerange,thecenterlineshowthemedianandtheboxlimitsindicatethe25thand75thpercentilesandthewhiskersshowstheremaining50%ofthedatarange.4讨论突触间隙中低浓度的谷氨酸可确保传入信号的正常传输。在我们的研究中，我们使用HPLC检测了大鼠TNC部位中的谷氨酸浓度水平，其中，CM组大鼠谷氨酸浓度明显高于sham组，这说明异常的谷氨酸浓度水平参与了CM的发病过程。EAAT2在清除细胞间隙谷氨酸和精确调节谷氨酸浓度方面起着至关重要的作用，q-PCR和Westernblots的结果显示CM大鼠EAAT2mRNA和蛋白表达较sham组大鼠都显着下调，这表明EAAT2的功能障碍可能是导致CM中枢敏化的关键因素。


本文编号：3475010