Slc26a9基因缺失致使胃粘膜上皮细胞分化紊乱导致慢性萎缩性胃炎发生发展

发布时间：2021-11-13 07:09

　　目的:前期有研究表明,Slc26a9基因的缺失会损害壁细胞的功能和生存,并且SLC26A9基因的下调导致了胃癌的发生发展。慢性萎缩性胃炎作为胃癌发生的更早事件,明确其发生及恶性转化机制,对胃癌早期诊断与及时干预具有特殊的迫切性与重要的科学价值。本课题旨在通过胃组织特异性Slc26a9敲除小鼠明确Slc26a9基因在慢性萎缩性胃炎发生发展中的重要作用,以及SLC26A9与慢性萎缩性胃炎病人的临床相关性。方法:1)运用qRT-PCR和IHC技术分别检测正常人胃黏膜及慢性萎缩性胃炎患者胃黏膜SLC26A9表达情况;2)委托广州赛业生物有限公司制备胃组织特异性Slc26a9敲除小鼠;运用PCR扩增技术、WB技术检测小鼠胃中Slc26a9敲除情况;3)自小鼠出生后1月起,每月测量Slc26a9^fl/fl和Slc26a9^fl/fl/Atp4b-Cre小鼠体重,计算小鼠生存率并绘制曲线;4)运用H&E染色技术观察了Slc26a9^fl/fl和Slc26a9^fl/fl/Atp4b-Cre小鼠自出生后8天到18... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

SLC26A9的下调与人类慢性萎缩性胃炎的发生有关

遵义医科大学硕士学位论文袁都敏28图2.将Slc26a9fl/fl小鼠与Atp4b-Cre小鼠杂交，获得胃特异性Slc26a9基因敲除小鼠。(A)胃特异性Slc26a9基因敲除(Slc26a9fl/fl/Atp-4b)小鼠基因敲除模式图。Slc26a9Wildtype（WT）等位基因的基因组结构示意图，Slc26a9基因敲除靶向结构示意图，Slc26a9靶向等位基因示意图以及Slc26a9缺失基因结构示意图如图所示。Loxp、Frt和新霉素位点已标明。(B)通过PCR扩增验证Slc26a9fl/fl和Slc26a9fl/fl/Atp4b-Cre小鼠基因型。Slc26a9WT、Slc26a9fl/fl和Atp4b-Cre等位基因扩增片段分别为247bp、304bp和800bp。(C)WB检测小鼠胃组织中Slc26a9的表达水平。Loxp:X-overP1基因座；Cre：导致重组。Frt：Flp识别目标：Neor：新霉素。Figure2.Slc26a9fl/flmicewerecrossedwithAtp4b-Cremicetoproducetheparietalcells-specificSlc26a9knockoutinSlc26a9fl/fl/Atp4b-Cremice.(A)GenerationofSlc26a9fl/fl/Atp4b-Cremice.SchematicrepresentationofgenomicstructureofSlc26a9Wildtype(WT)allele,Slc26a9genetargetingconstruct,Slc26a9targetedallele,andSlc26a9nullallele.Loxp,FrtandNeomycinsitesareindicated.(B)GenotypesofSlc26a9fl/fl/Atp4b–Cre,Slc26a9WTandSlc26a9fl/flmiceweredeterminedbyPCRamplification.Slc26a9WT,Slc26a9fl/fl,andAtp4b-Crealleleswereevidencedbyamplificationin247bp,304bp,and800bpfragments,respectively.(C)Slc26a9expressioninthestomachofSlc26a9fl/fl/Atp4b-CremiceandSlc26a9fl/flmiceweredetectedbyWesternblot.Loxp:LocusofX-overP1;Cre:Causesrecombination.Frt:Flprecognitiontarget;Neor:Neomycin2.3壁细胞特异性Slc26a9基因缺失对小鼠生长和生存无影响自小

遵义医科大学硕士学位论文袁都敏29图3.壁细胞特异性敲除Slc26a9基因对小鼠生长和生存无明显影响。(A)每月检测Slc26a9fl/fl/Atp-4b和Slc26a9fl/fl小鼠体重(g)记录并绘制曲线，差异不具有统计学意义；(B)Slc26a9fl/fl/Atp-4b和Slc26a9fl/fl小鼠在出生后18个月内的存活率没有明显差异。Figure3.Parietalcell-specificSlc26a9deletioncausednosignificanteffectonweightandsurvivalratio.(A)Thebodyweight(g)ofSlc26a9fl/fl/Atp-4bandSlc26a9fl/flmicewererecordedmonthly,thedifferencewasnotstatisticallysignificant;(B)ThereisnosignificantdifferenceofsurvivalratiobetweenSlc26a9fl/fl/Atp-4bandSlc26a9fl/flmiceafterbirth.2.4壁细胞特异性Slc26a9基因缺失可导致小鼠胃粘膜出现自发性慢性萎缩性胃炎，肠化生及恶性病理进程的发生Slc26a9fl/fl和Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠的胃组织病理学评价根据罗杰斯发布的评分系统进行[21]。杂合子小鼠的组织病理学评分与对照组小鼠几乎相同。病理组织学观察发现，Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠出生后第8天胃粘膜与Slc26a9fl/fl小鼠无明显差异；但1个月时在Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠胃黏膜观察到壁细胞缺失，2个月时观察到腺拉长、扩张，并伴随着泌酸腺体的萎缩（壁细胞和主细胞缺失)，6个月时观察到粘液细胞化生，包括表达痉挛多肽的上皮化生(SPEM)和肠上皮化生(IM)（图4A）。出生后18个月，Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠胃形态几乎是同龄Slc26a9fl/fl小鼠大小的2倍（图4B）。所有Slc26a9fl/fl/Atp-4b小鼠(20/20)胃黏膜表现出严重的胃肿瘤的癌前病变的表现包括慢性萎缩性胃炎(CAG)，粘液细胞化生以及深的囊肿形成。最终，发展为高级别上皮内瘤变(HGIN)，这被认为是早期GC[21,22](图

【参考文献】：
期刊论文
[1]Role of epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer initiation and progression[J]. Zhao Peng,Chen-Xiao Wang,Er-Hu Fang,Guo-Bin Wang,Qiang Tong.  World Journal of Gastroenterology. 2014(18)
[2]Gastro protective properties of the novel prostone SPI-8811 against acid-injured porcine mucosa[J]. Meghali Nighot,Adam Moeser,Ryuji Ueno,Anthony Blikslager.  World Journal of Gastroenterology. 2012(34)
[3]Role of potassium in acid secretion[J]. John P Geibel.  World Journal of Gastroenterology. 2005(34)



本文编号：3492571